[發明專利]一種茶葉總黃酮的制備方法、測試方法及應用

在審

• 申請號: 201710336296.8
• 申請日: 2017-05-13
• 公開（公告）號: CN107184452A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 吳杰
• 申請（專利權）人: 吳杰
• 主分類號: A61K8/9789
• 分類號: A61K8/9789;A61Q19/00;G01N21/31;G01N1/38;A23L33/105
• 代理公司: 浙江英普律師事務所33238
• 代理人: 陳小良

技術領域

本發明涉及一種茶葉總黃酮制備方法、測試方法及應用，特別是一種從茶葉中分離茶葉總黃酮的生產工藝和方法。

背景技術

茶葉總黃酮是以茶的葉采用合適的提取，分離和純化手段提取制得的一類產品，包括黃酮和黃酮醇類的提取物，該類成分也有重要的生理作用。已有事實證明茶中的類黃酮混合物具有非常強的抗氧化和清除自由基殺害的活性大大高于維生素C和E。同時茶中的類黃酮物質有維生素P的功能，能促進人體從食物中攝取并蓄積維生素C。茶葉總黃酮具有淺黃色，可流動的外觀，固有的香氣，味苦，可廣泛用于化妝品領域。其在化妝品領域主要作為輔料和功能性成分，主要有美白、收斂、保濕、防曬、抗皺等作用。

我國是世界上最大的茶葉產地之一，茶葉資源十分豐富。深入開展茶葉中總黃酮的提取及其生物學活性的研究，開發出一系列具有醫療和保健作用的化妝品在人類護膚美容方面將會發揮更大的作用，不僅可以滿足愛美人士的需要而且可以創造出巨大的經濟效益。

申請號為200610097615.6的發明專利公開了一種總黃酮提取物的制備方法，但該種方法針對的是黃蜀葵花，而非茶葉；并且在提取步驟、提取的純度、用途等多個方面存在較大區別。在現有技術中未發現從茶葉中提取總黃酮的制備方法，并進而將產物用于化妝品領域。

發明內容

本發明提供如下的技術方案：

(1)使用乙醇對茶葉進行提??；

(2)對提取液進行預處理:將步驟(1)的乙醇溶液提取液過濾，加入明膠溶液進行沉淀，過濾(若難以澄清，加入硅藻土處理)，濃縮干燥；

(3)大孔樹脂柱洗脫:將步驟(2)處理好的過濾液用少量水溶解，用大孔樹脂拌樣加在大孔樹脂柱上，先用水洗脫，然后分別不同梯度的乙醇對大孔樹脂柱進行洗脫；乙醇水溶液的梯度分別是:水、5％乙醇、10％乙醇、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、純乙醇；

(4)收集洗脫液:收集步驟(3)中自大孔樹脂柱中流出的20-60％乙醇之間的洗脫液；

(5)減壓濃縮:將步驟(4)中的洗脫液合并進行減壓濃縮，蒸干，控制溫度在40-50℃；

(6)溶解:步驟(5)蒸干得到的產物，加乙醇溶解；

(7)靜置；

(8)抽濾，取濾液，洗滌沉淀；

(9)濃縮干燥、研細粉，即得。

(10)含量測定：

對照品溶液制備：精密稱取在120℃干燥至恒重的蘆丁對照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻。精密量取20ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得(每1ml中含無水蘆丁0.2mg)。

標準曲線的制備：精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液Iml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應試劑為空白，立即照紫外一可見分光光度法，在500nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，獲得曲線斜率。

測定方法：取本品細粉約0.2g，精密稱定，置于索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取至提取液無色，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，加甲醇繼續提取至無色(約4小時)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，作為供試品貯備液。取供試品貯備液，濾過，精密量取續濾液5ml，置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取2ml，置25ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至6ml”起依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的重量，計算，即得。

本品按干燥品計算，含總黃酮以無水蘆丁(C27H3006)計，可以達到41％。

有益效果，本發明的從茶葉中分離純化高含量總黃酮的方法，主要目的是通過除去黃烷醇(兒茶素)類雜質增加黃酮(黃酮，黃酮醇)含量。其制備工藝簡單、可靠、成本低，過程中不使用有毒試劑，安全、可控。其所得總黃酮，含量高、浪費少。成品為棕褐色粉末，具較好的流動性，粘附較小?？勺鳛樵祥_發，用于化妝品、食品等領域。

附圖說明

圖1標準曲線圖

圖2樣品含量測定圖

具體實施方式

下面結合實施例對本發明做進一步的詳細說明，以下實施例是對本發明的解釋而本發明并不局限于以下實施例。

實施例1：

本實施例包括以下步驟：