[發明專利]用于SOST蛋白或抗體篩選的細胞株及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201710335781.3
• 申請日: 2017-05-12
• 公開（公告）號: CN108866002A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 高貝;沈毅珺
• 申請（專利權）人: 上海復旦張江生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C12N15/52;G01N33/53;G01N33/68
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;朱水平

本發明公開了一種用于SOST蛋白或抗體篩選的細胞株及其制備方法和應用。細胞株是穩定表達wnt1蛋白基因、LRP受體基因以及熒光素酶基因的HEK293細胞，該細胞株可用于SOST蛋白或抗體活性的評估或篩選。本發明公開的細胞株可以穩定傳代，其熒光強度較高，而且SOST蛋白對wnt1蛋白的抑制活性IC₅₀較低，且檢測窗口較大，可以更好的體現不同SOST抗體的生物學活性，提高穩定性，減少變異系數。在SOST蛋白或抗體活性的評估和/或篩選中具有快速、靈敏及穩定的優點。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種用于SOST蛋白或抗體篩選的細胞株、該細胞株的制備方法、包含該細胞株的制劑以及細胞株或制劑在SOST蛋白或抗體篩選中的應用。

背景技術

硬骨素蛋白(Sclerostin，SOST)由SOST基因編碼，其為213個氨基酸的分泌糖蛋白。硬骨素是含胱氨酸紐結(cystine-knot)因子超家族的成員，與DAN/Cerberus蛋白質家族相關，通過抑制骨形態發生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)與受體的結合直接干擾BMP信號，并因此干擾BMP信號級聯。由于硬骨素是骨形成的骨細胞特異性負調節物，這使得其成為用于骨質疏松癥治療的有吸引力的藥物靶。Amgen在開發用于骨質疏松癥治療的針對硬骨素蛋白的抗體，已向FDA提交上市申請，Novartis和Eli Lily也在開發硬骨素阻斷抗體，目前處于臨床2期。

硬骨素通過結合至低密度脂蛋白受體相關蛋白5和6(LRP5/LRP6)以及Frizzled受體作為典型的Wnt信號的負調控因子起作用。經典Wnt通路描述Wnt蛋白與細胞表面LRP/Frizzled受體家族結合后的一系列反應，包括胞內蛋白Dishevelled(Dsh)的激活及最終細胞核內β-catenin水平的變化。Dishevelled是細胞膜相關Wnt受體復合物的關鍵成分，它與Wnt結合后被激活，并抑制下游蛋白質復合物，包括axin、GSK-3與APC蛋白。axin/GSK-3/APC復合體可促進細胞內信號分子β-catenin的降解。當“β-catenin降解復合物”被抑制后，胞漿內的β-catenin得以穩定存在，部分β-catenin進入細胞核與TCF-LEF轉錄因子家族作用并促進特定基因的表達。β-catenin作為一種多功能的蛋白質，廣泛存在于各種類型的細胞，如內皮細胞、成纖維細胞、成骨細胞中，在參與這些細胞的增殖、分化和凋亡等方面發揮了重要的調節作用。Wnt/β-catenin途徑的激活是間葉細胞分化為骨骼和脂肪細胞，以及成骨細胞和軟骨細胞的分化所必需的。在調控骨量中β-catenin發揮了重要作用，通過增加骨保護素(OPG)的表達，從而提高了OPG與核因子-κB配體受體激活劑(RANKL)的比例，其凈效果是減少破骨細胞的生成。硬化蛋白SOST是LRP5/LRP6復合物的配體，阻止了受體與Wnt的結合，從而阻斷了Wnt/β-catenin信號通路。GSK-3β順利與多蛋白復合物結合，促使β-catenin的磷酸化，導致其最終降解。