[發明專利]嵌合蜘蛛絲及其用途

在審

• 申請號: 201710335250.4
• 申請日: 2011-09-28
• 公開（公告）號: CN107190017A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 馬爾科姆·詹姆斯·弗雷澤;蘭迪·劉易斯;唐·賈維斯;金佰利·湯普森;約瑟夫·赫爾;苗云根;弗洛倫斯·特磊;宋豐熙;金榮洙
• 申請（專利權）人: 圣母大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C07K19/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司11262
• 代理人: 李平,鄭霞

1.一種編碼嵌合蜘蛛絲多肽的核酸，其中所述嵌合蜘蛛絲多肽在N-末端到C-末端方向上包括：

(a)家蠶絲絲心蛋白重鏈(fhc)多肽的N-末端結構域(NTD)；

(b)一個或更多個重復片段，所述一個或更多個重復片段包括一個或更多個蜘蛛絲基序，

其中每個重復片段包括一個或更多個拷貝的彈性基序，所述一個或更多個拷貝的彈性基序在線性N-末端到C-末端方向上共價連接到一個或更多個強度基序；以及

(c)家蠶絲fhc多肽的C-末端結構域(CTD)；

其中所述彈性基序包括一個或更多個鞭狀樣(Flag-樣)基序、大腺絲蛋白樣(MaSp-樣)基序或小腺絲蛋白樣(MiSp-樣)基序；并且

其中所述一個或更多個MaSp-樣基序包括一個或更多個MaSp1基序或MaSp2基序；

其中所述鞭狀樣彈性基序是選自由SEQ ID NO 27-29組成的組的一致序列中的重復氨基酸基序；

其中所述MaSp-樣彈性基序是選自由SEQ ID NO 18-23組成的組的一致序列中的重復氨基酸基序；并且

所述MiSp-樣彈性基序是選自由SEQ NO 24-26組成的組的一致序列中的重復氨基酸基序。

2.如權利要求1所述的核酸，其中包括一個或更多個蜘蛛絲基序的所述一個或更多個重復片段包括

14至42個蜘蛛絲基序的重復片段，

每個重復片段包括4至16個拷貝的彈性基序(E)，所述4至16個拷貝的彈性基序(E)在線性N-末端到C-末端方向上共價連接到包括強度基序(S)的序列。

3.如權利要求1或2所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛絲多肽還包括一個或更多個接頭。

4.如權利要求1或2所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛絲多肽還在所述彈性基序和所述強度基序之間包括一個或更多個接頭。

5.如權利要求2-4中任一項所述的核酸，其中所述彈性基序為GPGGA(SEQ ID NO:2)并且所述強度基序為GGPSGPGSAAAAAAAA(SEQ ID NO:3)。

6.如權利要求1-5中任一項所述的核酸，其中所述編碼嵌合蜘蛛絲多肽的核酸

在其5’端的側翼為包括家蠶絲絲心蛋白重鏈(fhc)基因的主啟動子、上游增強子元件(UEE)、以及基礎啟動子的核酸，并且

在其3’端的側翼為包括家蠶絲絲心蛋白重鏈(fhc)基因的轉錄終止位點和聚腺苷酸化位點的核酸。

7.一種核酸，所述核酸在5’到3’方向上包括以下序列：

(a)包括轉座子的第一末端重復的序列；

(b)第一調控序列，所述第一調控序列包括家蠶絲絲心蛋白重鏈(fhc)基因的主啟動子、上游增強子元件(UEE)、以及基礎啟動子，其中所述啟動子可操作地連接到編碼嵌合蜘蛛絲多肽的核酸序列；

(c)所述編碼嵌合蜘蛛絲多肽的核酸序列，其中所述嵌合蜘蛛絲多肽在N-末端到C-末端方向上包括：

(i)家蠶絲絲心蛋白重鏈(fhc)多肽的N-末端結構域(NTD)；

(ii)14至42個蜘蛛絲基序的重復片段，每個重復片段包括4至16個拷貝的彈性基序(E)，所述4至16個拷貝的彈性基序(E)在線性N-末端到C-末端的方向上共價連接到包括強度基序(S)的序列；

其中所述彈性基序(E)為GPGGA(SEQ ID NO:2)；并且所述強度基序(S)為GGPSGPGSAAAAAAAA(SEQ ID NO:3)；和

(iii)家蠶絲fhc多肽的C-末端結構域(CTD)；

(d)第二調控序列，所述第二調控序列包括家蠶絲絲心蛋白重鏈(fhc)基因的轉錄終止位點和聚腺苷酸化位點；以及

(e)包括轉座子的第二末端重復的序列；

其中至少一個所述啟動子在轉化的家蠶細胞或組織中是有活性的；

其中至少一個所述末端重復促進序列(b)、(c)和(d)轉座到轉化的家蠶的基因組中。

8.如權利要求7所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛絲多肽還包括一個或更多個接頭。

9.如權利要求7所述的核酸，其中所述嵌合蜘蛛絲多肽還在所述彈性基序和所述強度基序之間包括一個或更多個接頭。

10.如權利要求1-9中任一項所述的核酸，其中所述核酸編碼功能相似的嵌合蜘蛛絲多肽，其中所述多肽還包括一個或更多個保守氨基酸置換、插入或刪除。