[發(fā)明專利]NAPRT1基因及其編碼蛋白的用途

在審

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• 申請日: 2017-05-12
• 公開（公告）號: CN107190057A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳心春
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳市中知專利商標(biāo)代理有限公司44101
• 代理人: 呂曉蕾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及NAPRT1基因及其編碼蛋白的用途。

背景技術(shù)

結(jié)核病(Tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染性疾病。結(jié)核病 仍然是當(dāng)前危害人類健康最嚴(yán)重的傳染病之一。中國現(xiàn)有超過500萬名結(jié)核病活動性患者， 而感染結(jié)核病菌的人數(shù)則超過5億人，占全國總?cè)丝诘?5％。；全球約三分之一的人口感染 結(jié)核分枝桿菌，在這些被稱為結(jié)核菌潛伏感染(LTBI)的人群中，有約10％最終將進(jìn)展為活 動性結(jié)核病。

造成結(jié)核病流行的現(xiàn)狀有多個方面的原因，其中缺乏特異、有效的結(jié)核感染診斷技術(shù) 是重要的原因之一。由于不能早期發(fā)現(xiàn)和診斷結(jié)核菌感染/結(jié)核病，導(dǎo)致延誤病人治療機(jī)會， 增加治療費(fèi)用和死亡率，而對于社區(qū)結(jié)核病的預(yù)防控制來說，沒有能夠有效的控制傳染源， 造成結(jié)核病的擴(kuò)散。因此，研制特異有效的結(jié)核菌感染診斷試劑對結(jié)核病防治具有十分重 要的意義。

目前國內(nèi)臨床采用的結(jié)核菌感染實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要有兩類：微生物學(xué)檢查和免疫學(xué) 檢測。前者包括痰或組織標(biāo)本找抗酸菌，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)和PCR核酸檢測；后者有抗體和 細(xì)胞免疫檢測，細(xì)胞免疫檢查包括PPD皮試和IGRA技術(shù)。細(xì)菌學(xué)檢查是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn)， 但臨床上相當(dāng)部分的病人沒有辦法留取痰標(biāo)本，在能獲得痰標(biāo)本的病例中，即便是水平最 高的醫(yī)院，抗酸染色和細(xì)菌培養(yǎng)檢查的陽性率約為40％。采用PCR可以適當(dāng)提高敏感性至70％ 左右，但同樣受限于痰標(biāo)本的有無。使用血清抗體檢測簡便易行，陽性率在50％－80％，但 特異性低，一般不超過70％。PPD皮試是目前檢測結(jié)核菌感染最常用的細(xì)胞免疫檢查方法， 雖然操作簡單，但病人需要在皮試后72小時查驗(yàn)，最主要的是PPD皮試所用抗原與BCG有交 叉反應(yīng)，無法區(qū)分BCG免疫反應(yīng)和現(xiàn)癥結(jié)核菌感染。利用免疫學(xué)檢測目前最好的檢測方法是 IGRA技術(shù)，其敏感性是現(xiàn)有的診斷技術(shù)中最高的。然而，IGRA檢測無法有效區(qū)分活動性結(jié) 核和結(jié)核菌潛伏感染。對于我國這樣的結(jié)核菌感染高發(fā)的地區(qū)，IGRA的診斷效率更為有限。

NAPRT1(nicotinate phosphoribosyltransferase domain containing 1，煙酸酯磷 酸核糖轉(zhuǎn)移酶域1)是細(xì)胞代謝中的重要酶，其底物煙酸(NA)在NAD生物合成中的重要 前體。NAPRT1能增強(qiáng)胞內(nèi)NAD水平以及抑制氧化應(yīng)激。目前發(fā)現(xiàn)結(jié)核病人可表達(dá)NAPRT1， 然而其在結(jié)核中的作用機(jī)制并不清楚。尚沒有關(guān)于NAPRT1基因作為結(jié)核診斷標(biāo)志物的報(bào) 道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種NAPRT1基因及其編碼蛋白的用途，NAPRT1基因 及其編碼蛋白可作為判別結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核的分子標(biāo)志物。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供NAPRT1基因及其編碼蛋白的用途，其特征在于，用于制 備判別結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核的產(chǎn)品的用途。

進(jìn)一步，所述判別結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核的產(chǎn)品包括：用實(shí)時定量PCR或基因芯 片檢測判別結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核的產(chǎn)品。

進(jìn)一步，所述用實(shí)時定量PCR判別結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核的產(chǎn)品至少包括一對特 異擴(kuò)增NAPRT1基因的引物。

進(jìn)一步，所述特異擴(kuò)增NAPRT1基因的引物序列如SEQ ID NO:1和2所示。

SEQ ID NO:1為(5'—3')GCAGTAGTGGCTCCACCTG；記為NAPRT1F：

SEQ ID NO:2為(5'—3')TGGACATGCTGCAGTTAGC；記為NAPRT1R。

進(jìn)一步，所述用基因芯片檢測判別結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核的產(chǎn)品包括：與NAPRT1 基因的核酸序列雜交的探針。

本發(fā)明的NAPRT1基因及其編碼蛋白的用途即可作為判別結(jié)核潛伏感染和活動性結(jié)核的 分子標(biāo)志物。

利用本發(fā)明可以檢測NAPRT1基因的表達(dá)情況，從而判別是否患有活動性結(jié)核病。

在本發(fā)明中，術(shù)語“引物”是指一種寡核苷酸，可以是天然的也可以是合成的，它可 以作為在一定條件下誘發(fā)DNA合成的起始點(diǎn)，在合適條件下誘發(fā)合成與核酸鏈互補(bǔ)的引物 擴(kuò)增產(chǎn)物，即在四種不同的三磷酸脫氧核糖核苷及一種聚合試劑(即DNA聚合酶或逆轉(zhuǎn)錄 酶)存在下，在一種合適的緩沖液中并在合適的溫度下進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。優(yōu)選的引物是單股 寡脫氧核糖核苷酸。引物的合適長度取決于該引物的設(shè)計(jì)用途，但一般在15～25個核苷酸 之間。