[發(fā)明專利]一種鑒定長臂猿性別的PCR引物、試劑盒及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710333931.7
• 申請日: 2017-05-12
• 公開（公告）號: CN107164467A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃勉;植廣林;袁子國;陳絢姣;左珂菁;王俊杰;黃海英;吳其銳;梁玉珍;陳譚子芃
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州動物園
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標事務(wù)所有限公司44205
• 代理人: 舒勝英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定長臂猿性別的PCR引物、試劑盒及方法，該方法教傳統(tǒng)SRY1作為引物進行性別鑒定方法具有特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢。

背景技術(shù)

長臂猿(Hylobatidae)是一類分布于東南亞地區(qū)的小型猿類，與黑猩猩、猩猩和大猩猩同屬于類人猿(Ape)。通常營一夫一妻制家庭生活，3至5年繁殖一次，每胎1子，8歲左右性成熟。人工飼養(yǎng)的長臂猿會作為科學(xué)研究實驗動物或者觀賞動物，分別被引入到動物實驗室或動物園。長臂猿在性成熟之前，性征表現(xiàn)不明顯，通過外觀難以鑒定其性別。在長臂猿的引種過程中，一般不直接引入成年長臂猿，因為生活環(huán)境與氣候的改變，容易引發(fā)長臂猿的生理或心理健康疾病。故引種時，一般會選擇幼年的長臂猿。為了長臂猿繁殖和育種的需要，在引種時會同時引入雄性長臂猿和雌性長臂猿。因此，對性發(fā)育尚未成熟的幼年長臂猿進行性別鑒定，是具有必要性的。

長臂猿基因組與人類基因組相近。在藥物研發(fā)過程中，以長臂猿為對象對藥物效應(yīng)動力學(xué)及藥物代謝動力學(xué)的研究具有重要意義。對幼年長臂猿進行性別鑒定，可根據(jù)性別進行不同的針對性試驗，有利于提高試驗的效率和指向性。而現(xiàn)有鑒定幼年長臂猿的方法，在靈敏度、特異性方面均較差，所以建立一種特異性和靈敏度較高，且成本較低的快速鑒定長臂猿性別的方法具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種鑒定長臂猿性別的PCR引物。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種鑒定長臂猿性別的試劑盒。

本發(fā)明的再一目的在于提供一種鑒定長臂猿性別的方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種鑒定長臂猿性別的PCR引物，其核苷酸序列如下所示：

SRY233-F1：5’-GGGTCGCTTCACTCTATC-3’(SEQ ID NO：1)，

SRY233-R1：5’-GCTCTGGCACCTTTCAATT-3’(SEQ ID NO：2)。

一種鑒定長臂猿性別的試劑盒，該試劑盒含有上述所述的引物。

進一步的，上試劑盒還含有內(nèi)參引物，其核苷酸序列如下所示：

β-actin-F：5’-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3’(SEQ ID NO：3)，

β-actin-R：5’-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3’(SEQ ID NO：4)。

一種鑒定長臂猿性別的方法，包括以下步驟：

1)長臂猿基因組DNA的提取；

2)以基因組DNA為模板，以上述所述SRY1-F2和SRY1-R2為引物、β-actin-F和β-actin-R為內(nèi)參，進行PCR擴增；

3)凝膠電泳檢測PCR擴增效果，分析長臂猿的性別。

進一步的，步驟2)中，所述的PCR擴增的體系為：

進一步的，步驟2)中，所述的PCR擴增的反應(yīng)程序為：98℃預(yù)變性5min，98℃變性10s，50℃退火15s，72℃延伸30s，72℃終延伸10min，共32個循環(huán)。

本發(fā)明的有益效果是：

1)本發(fā)明提供的方法可對長臂猿性別進行快速鑒定，鑒定結(jié)果不受年齡條件的限制。該方法為雌雄性征表現(xiàn)差異極小的幼齡長臂猿性別鑒定提供了一種技術(shù)手段，較傳統(tǒng)使用SRY1引物擴增677bp片段的方法更為特異和靈敏，也為動物園及實驗室的引種程序進行優(yōu)化，避免了引種性別錯誤帶來的飼養(yǎng)成本浪費。

2)本發(fā)明的引物對SRY233-F1和SRY233-R1對長臂猿性別鑒定具有很好的檢測效果，PCR擴增效率高，檢測靈敏度高，特異性強。本發(fā)明較傳統(tǒng)SRY1為引物的PCR反應(yīng)擴增的靈敏性高10倍，能對幼齡長臂猿快速且準確地進行性別鑒定。

3)本發(fā)明方法對樣品的采集簡易，樣品采集過程對長臂猿的損傷性小，只需采集長臂猿的血液便可進行實驗，簡便快速。

附圖說明

圖1為現(xiàn)有傳統(tǒng)引物SRY1用于PCR擴增鑒定長臂猿性別的結(jié)果，標號219042和大的長臂猿為雌性，標號218663和小的長臂猿為雄性；

圖2為SRY233和SRY1為引物的PCR擴增結(jié)果，圖中Marker為DL2000(2000bp、1000bp、750bp、500bp和250bp)；泳道1和2為本發(fā)明引物SRY233(SRY233-F1和SRY233-R1)擴增結(jié)果；泳道3和4為現(xiàn)有引物SRY1(SRY1-F2和SRY1-R2)的擴增結(jié)果；