[發(fā)明專利]β-葡萄糖苷酶在轉(zhuǎn)化淫羊藿總黃酮制備寶霍苷I中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710333064.7
• 申請日: 2017-05-12
• 公開（公告）號: CN107164436B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙林果;裴建軍;解靜聰;趙順懿;房仙穎;陳安娜
• 申請（專利權(quán)）人: 南京林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P19/60
• 分類號: C12P19/60;C12P19/14;A61K31/7048;A61P35/00
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 唐循文

β?葡萄糖苷酶在轉(zhuǎn)化淫羊藿總黃酮制備寶霍苷I中的應(yīng)用。該方法是利用一種特異的β?葡萄糖苷酶定向轉(zhuǎn)化淫羊藿總黃酮，使淫羊藿總黃酮中含量豐富的多個組分都轉(zhuǎn)化為寶霍苷I。本發(fā)明篩選獲得的一種β?葡萄糖苷酶，不僅能高效地酶解淫羊藿總黃酮中富含的淫羊藿苷、朝霍定A、箭藿苷A制得寶霍苷I，而且能特異地將朝霍定B和箭藿苷B制得寶霍苷I。本發(fā)明酶使用成本低，只需一種酶；總黃酮的轉(zhuǎn)化效率高，摩爾轉(zhuǎn)化率大于95%。而且所制備的寶霍苷I對乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、肺癌等腫瘤增殖的抑制作用等方面的藥理學(xué)活性顯著高于淫羊藿總黃酮中其它的主要淫羊藿苷。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥及保健品領(lǐng)域，具體涉及β-葡萄糖苷酶在轉(zhuǎn)化淫羊藿總黃酮制備寶霍苷I中的應(yīng)用及寶霍苷I在制備治療乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、肝癌藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

黃酮具有廣泛的藥理活性，體外、體內(nèi)實驗及臨床試驗都表明，部分黃酮類化合物對于癌癥的預(yù)防與治療具有重要的意義。它們的抗氧化特性能夠減少細胞DNA的養(yǎng)化損傷、從而降低DNA的突變，還可以抑制各種致癌物的體內(nèi)激活，并提高機體清除致癌物質(zhì)，對于癌細胞黃酮類化合物還可以抑制其增殖型號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，阻滯癌細胞周期誘發(fā)癌細胞凋亡從而控制癌細胞的增殖。因此，黃酮類化合物對癌癥的治療與防治具有重要的意義。此外部分研究表明，某些腫瘤細胞表面存在鼠李糖凝集素，能夠特異性地結(jié)合鼠李糖。抗腫瘤藥物的糖基化修飾會增強藥物的靶向性、減少對正常細胞的損害、減少藥物給劑量以及提高療效，而且還可以用來研究不同腫瘤細胞的藥物敏感性。

淫羊藿屬于小檗科植物，具有增加心腦血管血流量、促進造血功能、免疫功能及骨代謝，具有補腎壯陽、抗衰老、抗腫瘤等功效。而淫羊藿富含特有的鼠李糖苷黃酮類化合物，同時在我國多地區(qū)實現(xiàn)規(guī)模化人工種植，其資源豐富，有利于獲取大量的淫羊藿提取物。通過對淫羊藿提取物成分的分析，已發(fā)現(xiàn)并確認了其中幾種含量較高的富含鼠李糖苷黃酮類化合物，包括朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷。但研究表明，在淫羊藿中含量較低的組分寶霍苷I藥理活性獨特，對癌細胞具有顯著的抑制作用并可誘導(dǎo)癌細胞凋亡，在腫瘤治療方面存在廣闊的應(yīng)用前景。然而，由于其在淫羊藿植株中含量太低，無法高效大量地提取分離供以實際應(yīng)用。根據(jù)對淫羊藿黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究發(fā)現(xiàn)，霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷的黃酮母核與寶霍苷I完全一致，僅在糖基個數(shù)及種類上存在差異。

綜合考慮上述問題，通過選擇性地去除與寶霍苷I有差異的糖基，即可獲得目的產(chǎn)物寶霍苷I，根據(jù)已公布文獻可見，目前制備寶霍苷I生物轉(zhuǎn)化方法較為單一，幾乎都是以多組分淫羊藿苷為底物，未對淫羊藿總黃酮達到高效利用，如CN103160553通過葡聚糖酶水解淫羊藿苷制備寶霍苷I；CN103305572通過酵母菌厭氧發(fā)酵僅將淫羊藿中的淫羊藿苷轉(zhuǎn)化生成寶霍苷I。從而在制備過程中，首先要獲得淫羊藿提取物，然后分離得到淫羊藿苷，然后通過酶法或微生物法轉(zhuǎn)化，不僅大大增加了成本，而且沒有充分高效利用朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C。另一方面，使得大量獲取淫羊藿苷資源問題非常突出，無法保障規(guī)模化制備寶霍苷I。并且，現(xiàn)有的酶法或微生物法轉(zhuǎn)化淫羊藿苷的效率還有待提高。而本發(fā)明提供了一種酶法轉(zhuǎn)化淫羊藿總黃酮制備寶霍苷I的方法，僅僅通過一種具有高效水解葡糖糖苷酶和木糖苷酶的雙功能酶特性的β-葡萄糖苷酶，不僅能高效地酶解淫羊藿總黃酮中富含的淫羊藿苷、朝霍定A、箭藿苷A制得寶霍苷I，而且能特異地將朝霍定B和箭藿苷B制得寶霍苷Ⅰ。

發(fā)明內(nèi)容

解決的技術(shù)問題：本發(fā)明提供一種β-葡萄糖苷酶在轉(zhuǎn)化淫羊藿總黃酮制備寶霍苷I中的應(yīng)用，僅利用一種酶不僅能高效地酶解淫羊藿總黃酮中富含的淫羊藿苷，而且能高效地酶解富含的朝霍定A、箭藿苷A制得寶霍苷I，并且能特異地將朝霍定B和箭藿苷B都制得寶霍苷I的方法。

技術(shù)方案：β-葡萄糖苷酶在轉(zhuǎn)化淫羊藿總黃酮制備寶霍苷I中的應(yīng)用，利用β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿總黃酮中富含的淫羊藿苷、朝霍定A、箭藿苷A制得寶霍苷I，且特異地將朝霍定B和箭藿苷B制得寶霍苷I。

所述β-葡萄糖苷酶來源于細菌或真菌。