[發(fā)明專利]一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710332651.4
• 申請日: 2017-05-12
• 公開（公告）號: CN107018902A
• 公開（公告）日: 2017-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 俞金奎;周杭杰
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州濟生農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務(wù)所(普通合伙)11362
• 代理人: 郭防,張梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，特別是一種增殖率高的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內(nèi)障等方面均有良好療效。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鐵皮石斛對非特異性及特異性免疫均有增強作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內(nèi)障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學(xué)成分較復(fù)雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯(lián)芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。石斛堿型倍半萜類生物堿為石斛屬植物特有，其中石斛堿是最早發(fā)現(xiàn)，研究最多的生物堿；金釵石斛堿與非甾體類抗炎藥藥理作用相似，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、擴張血管等作用。

目前，利用組培技術(shù)對鐵皮石斛在種質(zhì)保存和快速繁殖方面已取得一定成就，但優(yōu)良品種經(jīng)數(shù)次繼代或因激素使用不當(dāng)、培養(yǎng)環(huán)境等因素，增殖率及低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的，是提供一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，本發(fā)明方法對鐵皮石斛進行組織培養(yǎng)時，增殖率高達358.5％，幼苗長勢好。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。

一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)50-60天，即得。

前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述生根培養(yǎng)基按重量份計算主要由黃蓮5-15份、白芍10-20份、血竭5-15份、三七10-20份、生姜5-15份、茯苓5-15份、蛋白胨1-10份、土豆1-10份、馬鈴薯1-5份和黃豆5-15份制成。

前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述生根培養(yǎng)基按重量份計算，主要由黃蓮10份、白芍15份、血竭10份、三七15份、生姜10份、茯苓10份、蛋白胨5份、土豆5份、馬鈴薯3份和黃豆10份制成。

前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述生根培養(yǎng)基按下述步驟進行制備：

(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，過濾，濾渣棄去，收集濾液，得A品；

(2)取土豆和馬鈴薯，加入5-6倍量水，打成漿，得B品；

(3)取黃豆，粉碎成粉末，得C品；

(4)A品、B品混合，加熱至50-60℃，加入C品和蛋白胨，攪拌5-10min后，冷卻至5-10℃，即得。

前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述幼苗培養(yǎng)基按重量份計算主要由熟玉米泥10-20份、山藥泥10-20份、芋頭泥10-20份、瓊脂1-5份和中藥渣20-30份混勻，即得。

前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述幼苗培養(yǎng)基按重量份計算，主要由熟玉米泥15份、山藥泥15份、芋頭泥15份、瓊脂3份和中藥渣25份混勻，即得。

前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的葛根50-60份、威靈仙30-40份、夏枯草20-30份、合歡皮10-20份、穿心蓮1-10份和蒼術(shù)20-30份按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術(shù)加5-6倍量水，煎煮2-3h，過濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。

前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的葛根55份、威靈仙35份、夏枯草25份、合歡皮15份、穿心蓮5份和蒼術(shù)25份按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術(shù)加5.5倍量水，煎煮2.5h，過濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。

申請人對本發(fā)明進行了大量的實驗研究，部分實驗如下：

實驗例.

1方法

設(shè)置2個處理組，即本發(fā)明組和對比組。

本發(fā)明組：按實施例1進行組織培養(yǎng)；

對比組：組織培養(yǎng)方法同實施例1，但所述生根培養(yǎng)基中不含黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，所述幼苗培養(yǎng)基中不含中藥渣。

60d后觀察，統(tǒng)計組培苗的生長情況。

統(tǒng)計方法：

生長值(cm)＝統(tǒng)計時平均株高-繼代時平均株高；

增殖率(％)＝(統(tǒng)計時苗總數(shù)一繼代時苗總數(shù))/初始苗總數(shù)×100％。

2結(jié)果