[發(fā)明專利]一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710332208.7
• 申請日: 2017-05-12
• 公開（公告）號: CN107238588B
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發(fā)明（設計）人: 賈蘭;苗洋;陳松;高菲;張耀東;侯文娟
• 申請（專利權）人: 太原理工大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 太原市科瑞達專利代理有限公司 14101
• 代理人: 盧茂春

1.一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體，其特征在于該超分子組裝體是由季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉通過靜電作用形成的復合物水溶液，所述的季銨型陽離子雙子表面活性劑化學結構式為：

或 ，

其中n=12，14，16。

2.權利要求1所述的一種無標記熒光檢測胰蛋白酶的超分子組裝體的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

Ⅰ 季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度CMC的測定；

將季銨型陽離子雙子表面活性劑溶解于濃度為10 mM，pH 8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10^-2 mol L^-1~10^-7 mol L^-1的梯度溶液；用微量進樣器移取10~50 μL尼羅紅的丙酮溶液，加入到梯度溶液中，使梯度溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6 mol L^-1，以40~100kHz敞口超聲波處理10~60分鐘，靜置0.5~12小時后進行熒光發(fā)射光譜檢測；以發(fā)射峰強度為縱坐標，表面活性劑的對數(shù)濃度為橫坐標作圖，得到S形曲線，曲線上第一個轉折點對應濃度即為雙子表面活性劑的臨界膠束濃度CMC；

Ⅱ 肝素鈉濃度的測定：

將肝素鈉溶解于濃度為10 mM，pH 8.0的磷酸鹽緩沖溶液中，配制濃度范圍為10~10^-5 mg mL^-1的梯度溶液；根據(jù)步驟I得到的季銨型陽離子雙子表面活性劑的臨界膠束濃度CMC，確定陽離子雙子表面活性劑的濃度為CMC的 0.3~1.6倍，按照體積比1:1加入到肝素鈉的梯度溶液中；用微量進樣器移取10~50 μL尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6 mol L^-1，以40~100kHz敞口超聲波處理10~60分鐘，靜置0.5~12小時后進行熒光發(fā)射光譜檢測；以發(fā)射峰強度為縱坐標，肝素鈉的對數(shù)濃度為橫坐標作圖，得到S形曲線，曲線上第二個轉折點對應濃度即為形成穩(wěn)定超分子組裝體的肝素鈉濃度；

Ⅲ 超分子組裝體溶液的配制：

按照步驟II中確定的季銨型陽離子雙子表面活性劑與肝素鈉的配比，將兩種溶液按照體積比1:1混合；用微量進樣器移取10~50 μL尼羅紅的丙酮溶液，加入到混合溶液中，使混合溶液中尼羅紅的終濃度為10^-6 mol L^-1，以40~100 kHz敞口超聲波處理10~60分鐘，靜置0.5~12小時后得到超分子組裝體溶液。