[發明專利]一種PHBA對映異構體雜質檢測方法

在審

• 申請號: 201710332154.4
• 申請日: 2017-05-12
• 公開（公告）號: CN107085058A
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發明（設計）人: 袁偉成;葛真真;徐小英;周鳴強;劉斌
• 申請（專利權）人: 成都麗凱手性技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 綿陽市博圖知識產權代理事務所(普通合伙)51235
• 代理人: 鄧昉

技術領域

本發明涉及藥物分析檢測技術領域，尤其涉及一種PHBA對映異構體雜質檢測方法。

背景技術

PHBA，即(S)-α-羥基-γ-N-鄰苯二甲酰亞氨基丁酸，是作為合成藥物阿米卡星的重要中間體。阿米卡星俗稱丁胺卡那霉素、阿米卡霉素，是第三代半合成氨基糖苷類抗生素，對大腸埃希菌、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、變形桿菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、銅綠假單胞菌及其他假單胞菌、不動桿菌屬、產堿桿菌屬等具有較強的藥理作用；對腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌、耶爾森菌屬、胎兒彎曲菌、結核桿菌及某些非結核分枝桿菌屬等據有較強的藥理作用。阿米卡星又具有低耳毒性、低腎毒性等優勢，在氨基糖苷類抗生素中所占的份額已由1999年5％上升到現在的12％，無論是非典型肺炎的治療還是禽流感的預防，阿米卡星都起到了重要作用，是我國臨床廣泛應用的抗生素之一。

PHBA的結構式如下：

由于PHBA具有一個手性碳原子，而該手性碳原子的取代基在空間中的

不同取向使其具有S構型和R構型兩種化合物，互為對映異構體；其對映

異構體雜即(R)-α-羥基-γ-N-鄰苯二甲酰亞氨基丁酸，其結構式如下：

其中，S構型才能用于合成阿米卡星，R構型則為其雜質。由于對映異構體具有相同的物理性質(如熔點、沸點、溶解度、密度等)和化學性質，僅在特殊手性環境下才能體現出差異。因此，一般普通的反相液相色譜法無法分離，需要一種新的方法對這個R構型的雜質進行質量監控。

從目前公開的技術文獻來看，PHBA多數采用旋光儀來測定其比旋度，由此來判定其是否具有較高光學純度。但比旋度法容易受配樣溶劑、配樣溫度、配樣濃度以及儀器穩定等多方面影響；而且需要高光學純度單一對映體作為對照物，所以現有的這種比旋度法存在準確性、穩定性較差，對儀器、操作人員和對照品的要求高等缺點。

另外，《中國藥典》規定，雜質與主要成分之間，以及雜質與雜質之間分離度(R)應大于1.5。分離度(R)為相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值，也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。分離度計算公式：R＝2(t_R2-t_R1)/(W₁+W₂)。R值越大，表明相鄰兩組分分離越好。一般說當R＜1時，兩峰有部分重疊；當R＝1.0時，分離度可達98％；當R＝1.5時，分離度可達99.7％。通常用R＝1.5作為相鄰兩組分已完全分離的標志。當R＝1時，稱為4σ分離，兩峰基本分離，裸露峰面積為95.4％，內側峰基重疊約2％。R＝1.5時，稱為6σ分離，裸露峰面積為99.7％。R≥1.5稱為完全分離。

發明內容

本發明的目的就在于提供一種PHBA對映異構體雜質檢測方法，以解決上述問題。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是這樣的：一種PHBA對映異構體雜質檢測方法，采用正相高效液相色譜法，其中色譜條件如下：

色譜柱：AD-H或AS-H

流動相組成：正己烷：異丙醇＝85:15-80:20(v/v)

流動相流速：0.8-1.2mL/min

檢測波長：220-280nm

柱溫：20-40℃

檢測器：紫外線檢測器或二級管陣列檢測器。

作為優選的技術方案：所述流動相中還含有三氟乙酸。

作為優選的技術方案：所述流動相流速為1.0mL/min。

作為優選的技術方案：所述檢測波長為280nm。

作為優選的技術方案：所述柱溫為30℃。

作為優選的技術方案：溶解供試品的溶劑為乙醇。

作為優選的技術方案：供試品溶液濃度為0.2-1mg/mL，進一步優選為0.2mg/mL。

作為優選的技術方案：單針進樣量為5-40μL，進一步優選為20μL。

通過實驗證明，AD-H(5μm x 4.6mm x 25cm)手性柱能實現PHBA與其對映異構體很好的分離效果。

與現有技術相比，本發明的優點在于：本發明采用手性色譜法的對映體過剩值(即ee值)測定，實現了PHBA與其對映異構體的分離，具有較高的靈敏度和專屬性，具有快速、靈敏、操作簡便和準確、不需要高純度單一對映體作為對照物等優點，分離度符合藥典規定，即分離度大于1.50，可用于PHBA的質量控制，本方法特別適合就高ee值對映體產物純度的準確測定。

附圖說明

圖1是實施例2中液相色譜圖；