[發明專利]一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法

在審

• 申請號: 201710331310.5
• 申請日: 2017-05-11
• 公開（公告）號: CN107137717A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 許佩佩;左華芹;江穎;周榮富;歐陽建;陳兵
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: A61K47/68
• 分類號: A61K47/68;A61K31/704;A61K31/675;A61P35/00
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司32252
• 代理人: 戴朝榮

1.一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)環境溫度為20±5℃，在全血中加入重量百分含量為2-4％檸檬酸鈉溶液，離心后得到血小板豐富血漿；

(2)將步驟(1)得到的血小板豐富血漿再深度離心，并用PBS緩沖液洗滌至不再含有血漿及其他血液成分，得到洗滌血小板；

(3)將步驟(2)得到的洗滌血小板與3-馬來酰亞胺基苯甲酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯試劑(MBS)試劑在37±0.5℃的避光環境中震蕩反應1～2小時，離心洗滌，得到表面修飾有指向巰基的馬來酰亞胺基團的血小板；

(4)將抗CD22單抗與Traut’s試劑在37±0.5℃的避光環境中震蕩反應1～2小時，然后超濾離心，得到富含巰基的抗CD22單抗；

(5)將步驟(3)得到的表面修飾有指向巰基的馬來酰亞胺基團的血小板與步驟(4)得到的富含巰基的抗CD22單抗混合，在37±0.5℃的避光環境中震蕩反應8～12小時，經離心洗滌，得到連接CD22單抗的血小板；

(6)將步驟(5)得到的連接CD22單抗的血小板與抗腫瘤藥物在37±0.5℃的避光環境中震蕩反應1～2小時，得到抗腫瘤藥物與連接CD22單抗的血小板反應物；

(7)將步驟(6)得到的抗腫瘤藥物與連接CD22單抗的血小板反應物通過瓊脂糖凝膠2B分離柱分離，并離心洗滌，得到攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗的血小板靶向載藥體系。

2.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中，全血與重量百分含量為2-4％檸檬酸鈉溶液的體積比為7:1～10:1。

3.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中離心為以1200rpm離心5～10min。

4.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中深度離心為以3600rpm離心8～12min，而得到洗滌血小板計數控制在(2.5-3.0)×10⁵/ul。

5.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)中洗滌血小板與MBS試劑體積比為50：1，而離心洗滌是用PBS緩沖液以3600rpm離心洗滌2～3次，每次5～8min。

6.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)中抗CD22單抗濃度為1mg/ml，且抗CD22 單抗與Traut’s試劑的濃度比為50:1，而超濾離心是于超濾離心管中3300rpm離心過濾20～30min。

7.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(5)中離心洗滌是用PBS緩沖液以3600rpm離心洗滌2～3次，每次5～8min。

8.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(6)中抗腫瘤藥物為蒽環類抗腫瘤藥物或烷化劑類抗腫瘤藥物的一種，抗腫瘤藥物的濃度為0.05～0.15mmol/L，且抗腫瘤藥物與連接CD22單抗的血小板、洗滌血小板的體積比分別為(1～4):1和2:1。

9.根據權利要求1所述的一種攜載抗腫瘤藥物連接CD22單抗靶向淋巴瘤的血小板靶向載藥體系的制備方法，其特征在于，所述步驟(7)中離心洗滌是用PBS緩沖液以3600rpm離心洗滌2～3次，每次5～8分鐘。