[發明專利]一種昆蟲病原線蟲活體繁殖方法

在審

• 申請號: 201710330920.3
• 申請日: 2017-05-11
• 公開（公告）號: CN107027715A
• 公開（公告）日: 2017-08-11
• 發明（設計）人: 許艷麗;程清泉;王義;潘鳳娟;韓曉增;張思佳
• 申請（專利權）人: 中國科學院東北地理與農業生態研究所
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所23109
• 代理人: 侯靜

技術領域

本發明涉及一種昆蟲病原線蟲的繁殖方法。

背景技術

昆蟲病原線蟲作為一種重要的生防因子，可通過寄生昆蟲幼蟲，有效地控制農田地下害蟲和鉆駐性害蟲。根據昆蟲病原線蟲繁殖載體的不同，將昆蟲病原線蟲繁殖方法分為活體繁殖法和離體繁殖法。離體繁殖法就是利用人工培養基，通過昆蟲病原線蟲隨身攜帶的共生細菌進行昆蟲病原線蟲繁殖，目前國內外均是采用該技術繁殖昆蟲病原線蟲，進行大量生產。但該技術對生產條件要求比較嚴格，且多采用液體發酵技術生產，導致生產成本高、技術難掌握。本發明是利用昆蟲病原線蟲寄主進行活體繁殖的工廠化生產，該技術簡化了生產過程，降低了生產成本和難度。

昆蟲病原線蟲是昆蟲的?；约纳鞌?，可寄生鞘翅目﹑雙翅目﹑同翅目﹑膜翅目、等翅目﹑鱗翅目﹑脈翅目﹑蜻蜓目和直翅目等近250多種昆蟲。該類線蟲可從昆蟲的肛門、氣孔、節間膜或隨寄主食物進入昆蟲體內，釋放攜帶的共生細菌，使寄主昆蟲患敗血病死亡。因此，人們利用該線蟲的特點進行害蟲生物防治，該線蟲對人畜安全，不污染環境。它具有寄主廣泛、主動尋找寄主、高效、快速、安全、易規模化生產等優點，尤其對于一些化學藥劑難以防治的鉆蛀性害蟲和土壤害蟲，有很好的防治效果。隨著化學殺蟲劑污染越來越嚴重、人們對害蟲無公害控制技術的渴望和害蟲抗藥性的增強，害蟲生物控制也逐步引起人們的重視，昆蟲病原線蟲作為一種很有潛能的生防因子，近年在國內外生物防治領域發展迅速。

昆蟲病原線蟲能否作為一種生防制劑在工業上大面積應用，關鍵在于解決線蟲的高效生產技術問題。目前國際上活體繁殖技術主要是采用大蠟螟(Galleria mellonella)進行繁殖，但現今該技術僅局限于實驗室試驗繁殖，產量極低，也有利用黃粉蟲生產線蟲，但該技術要借助固體載體進行繁殖，技術繁瑣。

發明內容

本發明是為了解決昆蟲病原線蟲活體繁殖效率低，無法工廠化生產的問題，提供一種昆蟲病原線蟲活體繁殖方法。

本發明昆蟲病原線蟲活體繁殖方法，按以下步驟進行：

一、選擇健康的鱗翅目夜蛾科的斜紋夜蛾(Prodenia litura(Fabricius))6齡幼蟲為昆蟲病原線蟲繁殖寄主；

二、將斜紋夜蛾幼蟲放置于容器中，放置密度為1頭/4cm²，使斜紋夜蛾幼蟲饑餓9～11小時后，將侵染期昆蟲病原線蟲接種到斜紋夜蛾幼蟲上，在室溫下進行侵染繁殖；

所述接種方法為：將侵染期昆蟲病原線蟲懸浮液均勻噴施到斜紋夜蛾幼蟲上，昆蟲病原線蟲與斜紋夜蛾幼蟲的個數比為(0.9～1.1)萬:1；

三、線蟲收獲：昆蟲病原線蟲在斜紋夜蛾幼蟲體內繁殖，待斜紋夜蛾幼蟲死亡后，移出已經死亡的斜紋夜蛾幼蟲，收集線蟲。使用自來水清洗線蟲，然后放入冰箱保存。

一般在接種昆蟲病原線蟲72小時以后，斜紋夜蛾幼蟲即死亡，準備收集線蟲。

進一步的，所述昆蟲病原線蟲為斯氏線蟲屬(Steinernema carpocapsae)的線蟲或異小桿線蟲屬(Heterorhabditis bacteriophora)的線蟲。

進一步的，步驟三所述收集線蟲的及具體方法為：

移出已經死亡的斜紋夜蛾幼蟲到無菌濾紙上，每條濾紙放120-150頭斜紋夜蛾幼蟲，濾紙下方放有吸了自來水的海綿塊，利用昆蟲病原線蟲趨水性，使線蟲爬出斜紋夜蛾幼蟲體內，透過濾紙進入有水的海綿塊中進行收集。在接種斜紋夜蛾幼蟲第5-7天就有昆蟲病原線蟲爬出，每天收集線蟲，收集10天，將線蟲放入10℃冰箱保存。

本發明的有益效果：

本發明方法可高效率繁殖昆蟲病原線蟲，繁殖技術采用的繁殖寄主是鱗翅目夜蛾科的斜紋夜蛾(Prodenia litura(Fabricius))幼蟲，技術原理是根據昆蟲病原線蟲可對斜紋夜蛾幼蟲進行活體寄生的特性；利用昆蟲病原線蟲的趨水性進行昆蟲病原線蟲收集和收獲；適合該繁殖方法的昆蟲病原線蟲包括斯氏線蟲屬(Steinernema carpocapsae)和異小桿(Heterorhabditis bacteriophora)線蟲屬。經過12-16天的繁殖可獲得昆蟲病原線蟲，每頭斜紋夜蛾幼蟲繁殖至少7-8萬頭昆蟲病原線蟲。

本發明在72小時以后寄主昆蟲已全部死亡，5-7天就有線蟲爬出，本方法的繁殖效率高、速度快。

本發明方法使用斜紋夜蛾作為寄主昆蟲，其體大，為33-50毫米，斜紋夜蛾幼蟲便于繁殖，且產量高。