[發(fā)明專利]一種總膽汁酸測定試劑盒及其測定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710329546.5
• 申請日: 2017-05-11
• 公開（公告）號: CN108872117A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉光華;楊玉軍;陳楚華;劉秋明
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州市伊川生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供一種總膽汁酸測定試劑盒，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1包括如下組分及其濃度：三羥甲基氨基甲烷10～20g/L、6N HCL 16～25g/L、硫代氧化型輔酶I 0.6～2g/L、KCL 6～15g/L；所述試劑R2包括如下組分及其濃度：三羥甲基氨基甲烷10～20g/L、6N HCL 16～25g/L、還原型輔酶I 4～8g/L、3a?羥類固醇脫氫酶6～15KU/L、聚乙二醇80～130g/L、甜菜堿溶液0.4～1.1ml/L。本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明提供的總膽汁酸測定試劑盒在提高試劑穩(wěn)定性的同時顯著增強(qiáng)了抗干擾能力，用于總膽汁酸的測定準(zhǔn)確性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種總膽汁酸測定試劑盒及其測定方法。

背景技術(shù)

膽汁酸(3α-羥類固醇)是膽汁的重要組成成分，主要包括甘氨膽酸、脫氧膽酸、鵝去氧膽酸和石膽酸等存在形式，這些膽酸合起來稱為總膽汁酸(TBA)。血清中的膽汁酸水平是反映肝實質(zhì)損傷的重要證據(jù)，尤其在急性肝炎，慢性活動性肝炎、乙醇肝損傷和肝硬化時有較靈敏的變化。肝細(xì)胞發(fā)生病變時，血液中膽汁酸的含量升高。現(xiàn)有研究認(rèn)為血清中膽汁酸的測定，對肝膽疾病的診斷其敏感性高達(dá)70％以上，特異性高達(dá)90％以上，在肝硬化等慢性肝病發(fā)生時，膽汁酸升高的出現(xiàn)比白蛋白、膽固醇和膽固醇酯等的改變來得更早，因此對慢性肝病的診斷有重要意義。

TBA的測定方法包括色譜法、酶聯(lián)免疫法和酶學(xué)法等，酶學(xué)法由于檢測快速漸變，應(yīng)用廣泛。目前酶學(xué)法主要采用五代循環(huán)酶法膽汁酸測試試劑盒，均采用游離的酶以及輔酶，酶和輔酶的用量較大，穩(wěn)定性較差。膽汁酸被3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD)及β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)特異性地氧化，生成3-酮類固醇，同時β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)被還原成β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型(Thio-NADH)，新生成的3-酮類固醇在3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD)及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型(NADH)存在下，還原成膽汁酸，同時β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型(NADH)氧化為β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(NAD)。通過上述原理，血清中微量的膽汁酸在多次酶循環(huán)的過程中被放大，同時使生成的β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型(Thio-NAD)擴(kuò)增。通過405nm處測定β-硫煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型(Thio-NADH)吸光度的變化率，可求得樣本中膽汁酸的含量。

中國專利申請CN1632578公開了一種膽汁酸測定試劑，包括試劑1和試劑2，試劑1包括甘氨酸、Thio-NAD、Triton X-100和丙酮酸鈉等；試劑2包括3αHSD、NADH、苯基或烷基二醇、Triton X-100和硼氫化物等；加入硼氫化物和苯基或烷基二醇作為NADH的穩(wěn)定劑。

中國專利申請CN 102539791公開了一種測定總膽汁酸含量的試劑，由試劑1和試劑2兩部分組成，試劑1中含有氧化型β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、緩沖劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑和防腐劑，所述試劑2中含有還原型輔酶Ⅰ、羥類固醇脫氫酶、緩沖劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑以及防腐劑；試劑1和試劑2中均含有穩(wěn)定劑和表面活性劑，穩(wěn)定劑選自海藻糖、甘露醇、聚乙二醇、EDTA等的一種或幾種，表面活性劑選自：吐溫-20、曲拉通X-100、Brij 35等的一種或幾種。

現(xiàn)有的試劑盒使用的穩(wěn)定劑種類較多，雖然可以提高穩(wěn)定性，但抗干擾能力往往不夠理想。因此，提供一種穩(wěn)定性好且抗干擾能力好的膽汁酸測定試劑盒具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題(抗干擾能力不夠理想)，本發(fā)明提供一種總膽汁酸測定試劑盒，通過添加一定濃度的聚乙二醇1200和甜菜堿，在提高試劑盒穩(wěn)定性的同時顯著增強(qiáng)了抗干擾能力，可顯著降低膽紅素、血紅蛋白和甘油三酯等的干擾，用于總膽汁酸的測定準(zhǔn)確性好。

本發(fā)明的目的將通過下面的詳細(xì)描述來進(jìn)一步說明。