[發(fā)明專利]小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710328703.0
• 申請(qǐng)日: 2017-05-11
• 公開（公告）號(hào): CN107236671B
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高利;沈慧敏;陳萬權(quán);劉太國;劉博
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 高芬芳;劉丹

1.小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體的制備與再生方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)菌絲培養(yǎng)：將小麥光腥黑粉菌的冬孢子在水瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度為16℃，相對(duì)濕度為80％；培養(yǎng)6-9天后，用滅菌蒸餾水沖洗下來，收集菌液，離心去上清，得到菌絲；

(2)細(xì)胞壁裂解：以1.2mol/L氯化鉀溶液作為滲透壓穩(wěn)定劑，配制混合酶液，加入菌絲中，28℃振蕩酶解1.5-2.5h，即得到小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體；所述混合酶液與所述菌絲的配比為20ml：1g；所述混合酶液由質(zhì)量百分比濃度為1.5％的崩潰酶、1.5％的溶壁酶和1.5％的蝸牛酶組成；

(3)原生質(zhì)體再生：將得到的原生質(zhì)體用1.2mol/L的氯化鉀溶液重新懸浮后，涂布在固體TB3培養(yǎng)基上，16℃培養(yǎng)4天。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體的制備與再生方法，其特征在于：所述水瓊脂培養(yǎng)基的制備方法為：稱取20g瓊脂粉，加水定容到1L，高壓蒸汽滅菌。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體的制備與再生方法，其特征在于：所述小麥光腥黑粉菌冬孢子在水瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體的制備與再生方法，其特征在于：所述28℃振蕩酶解的時(shí)間為2h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體的制備與再生方法，其特征在于，所述振蕩酶解在180r/min的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥光腥黑粉菌原生質(zhì)體的制備與再生方法，其特征在于，所述TB3培養(yǎng)基的配方為：酵母提取物3g/L，酸水解酪蛋白3g/L，蔗糖200g/L，酵母粉10g/L。