[發明專利]與甘肅高山細毛羊羊毛細度相關的遺傳標記及其應用

有效

• 申請號: 201710326605.3
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN107034281B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 王繼卿;羅玉柱;胡江;劉秀;李少斌;朱建勛
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 呂玉博

1.與甘肅高山細毛羊羊毛細度相關的遺傳標記在鑒定甘肅高山細毛羊羊毛細度中的應用，其特征在于：所述應用包括以下步驟：

（1）提取待測羊的基因組DNA；

（2）以待測羊的基因組DNA為模板，利用引物對進行PCR擴增；

（3）檢測PCR擴增產物，如果擴增序列的開放閱讀框區中，等位基因為A，羊毛較細；等位基因為B，羊毛較粗；

所述遺傳標記位于KRTAP15-1基因上，具體的核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.1；

在序列表SEQ ID No.1的核苷酸序列中，其編碼區存在6個SNPs：c.133A/G、c.171C/T、c.229C/T、c.245T/C、c.323G/A和c.339T/C；

所述等位基因A為：在序列表SEQ ID No.2的核苷酸序列中，第133bp處的堿基為A，第171bp處的堿基為C，第229bp處的堿基為C，第245處的堿基為T，第323處的堿基為G，第339處的堿基為T；

所述等位基因B為：在序列表SEQ ID No.3的核苷酸序列中，第133bp處的堿基為A，第171bp處的堿基為C，第229bp處的堿基為T，第245處的堿基為C，第323處的堿基為A，第339處的堿基為C；

所述引物對為：

5'-GAACTCAGGAATCCCAACAG-3；

5'-TAACCATGAGGTGACTGGAG-3。

2.根據權利要求 1 所述的應用，其特征在于：步驟（2）中，所述PCR反應使用的擴增體系以20μL 計為：DNA 模板 1.0μL、10×PCR buffer 2.0μL、上下游引物各0.5μL、150μMdNTPs 0.3μL、0.5U TaqDNA polymerase 0.2μL 和 ddH₂O 15.5μL。

3.根據權利要求 2 所述的應用，其特征在于：步驟（2）中，所述 PCR 反應的條件為：

94℃預變性 2 分鐘，94℃變性 30 秒，60℃退火 30 秒，72℃延伸 30 秒，共 35 個循環，最后延伸 5 分鐘。

4.根據權利要求 2 所述的應用，其特征在于：步驟（3）中，所述檢測 PCR 擴增產物采用 SSCP 檢測，同時設置陽性對照，凝膠電泳后染色，得到 SSCP 電泳帶型圖，根據圖譜中條帶的類型和陽性對照結果對待測樣本的羊毛細度性狀進行判斷。

5.權利要求1所述與甘肅高山細毛羊羊毛細度相關的遺傳標記在甘肅高山細毛羊羊毛細度分子標記輔助育種中的應用。