[發(fā)明專利]一種檢測(cè)染色體數(shù)目異常的擴(kuò)增組合物及快速檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710326037.7
• 申請(qǐng)日: 2017-05-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108866175A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁丹軍;耿娟;鄭昭璟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州中翰金諾醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 劉曉春

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其是涉及一種檢測(cè)染色體數(shù)目異常的擴(kuò)增組合物及快速檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明主要針對(duì)中國(guó)人群18三體綜合征、13三體綜合征和性染色體非整倍體異常的臨床診斷進(jìn)行設(shè)計(jì)。與現(xiàn)有發(fā)明專利或同類型試劑盒相比，其優(yōu)勢(shì)在于：1. 檢測(cè)通量高；2. 檢測(cè)周期短；3. 靈敏度高；4. 準(zhǔn)確性高；5. 產(chǎn)前診斷中可排除母體污染，體系中STR位點(diǎn)多態(tài)性高，根據(jù)STR產(chǎn)物大小，可以判斷樣本是否來(lái)自同一個(gè)體，避免母體細(xì)胞污染的問(wèn)題；6. 對(duì)于嵌合體有更好的檢出率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，尤其是涉及一種檢測(cè)染色體數(shù)目異常的擴(kuò)增組合物及快速檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

染色體病是導(dǎo)致出生缺陷常見(jiàn)的一類遺傳性疾病，約占活產(chǎn)兒的1/120～1/150左右，主要表現(xiàn)為染色體數(shù)目異常和染色體結(jié)構(gòu)異常。染色體非整倍體異常是指細(xì)胞中個(gè)別染色體增多或減少形成的染色體數(shù)目異常。患兒通常具有智力低下、器官畸形或第二性征發(fā)育異常等臨床表現(xiàn)，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

最常見(jiàn)的染色體非整倍體異常包括21三體綜合征(Down’s syndrome)、18三體綜合征(Edward syndrome)、13三體綜合征(Patau syndrome)、45,X(Turner綜合征)、47,XXY(Klinefelter綜合征)、三倍體和嵌合體等，其中13、18、21及X/Y染色體異常占新生兒染色體數(shù)目異常的95％。這類疾病目前尚無(wú)有效的治療方案，只能通過(guò)產(chǎn)前篩查或產(chǎn)前診斷來(lái)減少或避免該類患兒的出生。

目前，臨床上以染色體核型分析為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行產(chǎn)前診斷時(shí)，要進(jìn)行羊膜穿刺取羊水，在體外培養(yǎng)羊水中的胎兒細(xì)胞，再進(jìn)行核型分析。該方法準(zhǔn)確、可靠，但需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)周期長(zhǎng)(2-3周)，操作復(fù)雜，依賴人工分析和經(jīng)驗(yàn)積累等諸多局限性。另一種臨床常用的技術(shù)為熒光原位雜交(FISH)，該技術(shù)一般用于染色體異常的輔助檢測(cè)，可在48小時(shí)內(nèi)快速診斷，但該方法手工操作繁瑣、對(duì)操作人員要求較高、費(fèi)用昂貴，均不能滿足大規(guī)模檢測(cè)的需要。

QF-PCR技術(shù)是一種通過(guò)對(duì)相應(yīng)染色體上的短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandemrepeat，STR)進(jìn)行擴(kuò)增，從而對(duì)染色體拷貝數(shù)目進(jìn)行判斷的一種有效方法。STR具有穩(wěn)定性和多態(tài)性，不同物種具有不同的長(zhǎng)度，取決于重復(fù)序列的重復(fù)次數(shù)，是第二代遺傳標(biāo)記，遵循孟德?tīng)栵@性遺傳規(guī)律。QF-PCR技術(shù)主要利用熒光標(biāo)記引物對(duì)染色體上STR位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，通過(guò)毛細(xì)管電泳熒光檢測(cè)系統(tǒng)確定擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度并實(shí)現(xiàn)對(duì)多態(tài)位點(diǎn)的分型，通過(guò)掃描軟件對(duì)預(yù)期大小的擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的峰面積定量，實(shí)現(xiàn)對(duì)原始模板量的定量。通過(guò)定性、定量分析STR的多態(tài)性，能診斷出99.2～100％目標(biāo)染色體的非整倍體異常(21、18、13、X和Y等5種染色體)，還可根據(jù)判別多余染色體的來(lái)源、鑒別母體組織污染，為臨床提供更多遺傳咨詢信息。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于，提供一種檢測(cè)染色體數(shù)目異常的擴(kuò)增組合物，對(duì)目標(biāo)染色體，選取在中國(guó)人群中雜合率較高的STR位點(diǎn)，對(duì)21號(hào)、18號(hào)、13號(hào)以及X、Y染色體非整數(shù)倍數(shù)目異常進(jìn)行檢測(cè)。

為此，本發(fā)明的上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：