[發(fā)明專利]KPNA2基因的應(yīng)用和抑制KPNA2基因表達的siRNA的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710324869.5
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN107022627B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郁雷;高麗;呂延杰
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 金相允

本發(fā)明提供了一種KPNA2基因的應(yīng)用和抑制KPNA2基因表達的siRNA的應(yīng)用，涉及醫(yī)藥基因工程的技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的KPNA2基因作為大腸癌生物標(biāo)記物的應(yīng)用，能夠有效指導(dǎo)大腸癌的臨床分期，也能夠準(zhǔn)確地判斷大腸癌患者的預(yù)后。本發(fā)明提供的能夠抑制KPNA2基因表達的siRNA，能夠有效地抑制大腸癌細(xì)胞的增值和遷移。本發(fā)明還提供了上述siRNA在制備KPNA2基因沉默型大腸癌細(xì)胞系的應(yīng)用，該細(xì)胞系可用于探究KPNA2與大腸癌的相關(guān)性及其機理，為深入研究KPNA2與大腸癌發(fā)生、發(fā)展的可能機制提供一種可靠的研究基礎(chǔ)，從而給大腸癌的靶向治療提供有效的治療靶點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種KPNA2基因的應(yīng)用和抑制KPNA2基因表達的siRNA的應(yīng)用。

背景技術(shù)

大腸癌作為四方國家發(fā)病率排第三位的惡性腫瘤。每年的發(fā)病人數(shù)約有120萬，其中位診斷年齡為70歲，但流行病學(xué)統(tǒng)計其發(fā)病具有年輕化傾向。在一些西方國家大腸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)下降趨勢，但是在一些國家尤其是發(fā)展中國家，大腸癌的發(fā)病率仍呈現(xiàn)明顯升高趨勢。隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展，國民生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，大腸癌的發(fā)病率在我國呈現(xiàn)出逐年增高的趨勢。大腸癌患者的預(yù)后與腫瘤分期相關(guān)，診斷時所處的分期越早，預(yù)后越好。因此，準(zhǔn)確的病理分期對治療方案的制定有著非常重要的意義。在臨床實踐中，治療方案的制定和對大腸癌患者預(yù)后的判斷依靠國際防癌聯(lián)盟(International Union AgainstCancer，UICC)制定的TNM分期。其中包括原發(fā)灶的侵及深度(T分期)，淋巴結(jié)(N分期)及遠隔臟器(M分期) 轉(zhuǎn)移和腫瘤分化程度。除此之外還包括了一些腫瘤其他的相關(guān)因素，包括腫瘤是否穿透腸管侵犯其他組織，檢出的淋巴結(jié)數(shù)目，腫瘤細(xì)胞的分化，神經(jīng)浸潤，微淋巴管和血管的癌栓等。即使有以上的危險因素作為TNM分期的補充，在臨床實踐中有時候卻不能準(zhǔn)確評估患者術(shù)前分期，仍然會經(jīng)常出現(xiàn)過度治療甚至治療不足的現(xiàn)象，從而造成治療失敗。目前尚沒有有效的生物標(biāo)記物來指導(dǎo)大腸癌的臨床分期。因此需要尋找新的生物標(biāo)記物來提高臨床分期的準(zhǔn)確性迫在眉睫。

隨著對抑癌基因和癌基因的定位和功能的研究深入，針對靶基因的治療已經(jīng)逐漸成為可能。因此，核胞漿轉(zhuǎn)運蛋白作為存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核之間雙向轉(zhuǎn)運蛋白越來越受到關(guān)注。核胞漿轉(zhuǎn)運蛋白α2(Karyopherin-a2， KPNA2)作為核胞漿轉(zhuǎn)運蛋白α家族的七個成員之一，由529個氨基酸組成，大小為58KDa。其結(jié)構(gòu)在九十年代中期被確定。KPNA2由親水性的輸入蛋白β結(jié)合區(qū)域的N末端，無功能的短酸性C-羧基末端和10個重復(fù)穿膜結(jié)構(gòu)的中心疏水區(qū)組成，這個區(qū)域與目標(biāo)蛋白的核定位信號相結(jié)合。輸入蛋白β結(jié)合區(qū)域已經(jīng)被證明存在自身抑制功能，從而確保KPNA2只有與輸入蛋白β結(jié)合的時候才會發(fā)生移位從而進行物質(zhì)的核胞漿轉(zhuǎn)運。自從Dahl 發(fā)現(xiàn)KPNA2在乳腺癌中的預(yù)后價值以來，KPNA2在惡性腫瘤中過表達逐漸引起腫瘤學(xué)家的關(guān)注。已經(jīng)證明KPNA2表達增高的腫瘤包括黑色素瘤、卵巢癌、食管癌、肺癌、宮頸癌、前列腺癌、腦癌、肝癌和膀胱癌。同時，有研究發(fā)現(xiàn)KPNA2的表達和腫瘤分期之間同樣存在著關(guān)聯(lián)，一部分研究證明了隨著腫瘤的進展KPNA2的表達也隨之增加。除了對腫瘤相關(guān)蛋白有相互作用之外，KPNA2還通過其他一些途徑參與腫瘤的形成和發(fā)展過程。雖然這些途徑并不是腫瘤發(fā)生的直接原因，但也可以影響到致癌作用。比如激活異常的分化途徑，病毒誘導(dǎo)的癌基因和調(diào)節(jié)免疫功能。

然而，目前國內(nèi)外尚無關(guān)于大腸癌和KPNA2基因表達相關(guān)性的文獻報道。

因此，探究KPNA2基因作為生物標(biāo)記物與大腸癌之間的相關(guān)性日益成為研究的熱點。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的在于提供一種KPNA2基因作為大腸癌生物標(biāo)記物的應(yīng)用。

本發(fā)明的第二個目的在于提供一種KPNA2基因在制備用于大腸癌篩檢試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第三個目的在于提供一種抑制KPNA2基因的表達在抑制大腸癌細(xì)胞的增殖和遷移中的應(yīng)用。