[發(fā)明專利]一種基于3型肺炎鏈球菌莢膜多糖的寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710323724.3
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN107224577B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 顧國鋒;熊成鶴;郭忠武;馮少杰;喬銀
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號: A61K39/09
• 分類號: A61K39/09;A61K39/385;A61P31/04;A61P11/00
• 代理公司: 濟南金迪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

本發(fā)明涉及一種基于肺炎鏈球菌3型莢膜多糖的寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用。一種肺炎鏈球菌3型莢膜多糖相關(guān)寡糖綴合物，結(jié)構(gòu)通式如下所示：本發(fā)明首次公開了肺炎鏈球菌3型莢膜多糖相關(guān)寡糖衍生物的合成，肺炎鏈球菌3型莢膜多糖相關(guān)寡糖衍生物可用來制備針對3型肺炎鏈球菌的新型寡糖?蛋白結(jié)合疫苗。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于肺炎鏈球菌3型莢膜多糖的寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用，屬于肺炎鏈球菌疫苗研制技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

肺炎鏈球菌是一種革蘭氏陽性雙球菌，在1881年同時由美國陸軍醫(yī)生GeorgeSternberg和法國化學(xué)家Louis Pasteur首次分離得到。它常寄居在人的鼻咽腔中，可造成呼吸道感染和肺部感染，嚴重時可引起腦膜炎、中耳炎、敗血癥等疾病。在發(fā)展中國家每年將近有100萬的5歲以下兒童死于這些疾病，預(yù)防和救治這些傳染性疾病需要花費大量的財力。

肺炎鏈球菌的表面有一層厚厚的糖衣，可以減小外界的影響和在一定程度上抵抗非特異性的人體免疫，該糖衣就是肺炎鏈球菌的莢膜多糖。研究表明，莢膜多糖是其致病的重要獨立因子因素。根據(jù)莢膜多糖的結(jié)構(gòu)不同，人們將肺炎鏈球菌分成多個亞型，如3型、6A型、6B型、23F型等等。截至目前為止，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)96種亞型，但是并不是所有的亞型都常見或有致病性，常見的致病亞型有3型、5型、19F型、6B型、23F型等。

長久以來，人們將抗生素作為抗肺炎鏈球菌感染的首選藥物。隨著對抗生素和其它抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性的菌株的出現(xiàn)，臨床上治療肺炎鏈球菌感染面臨很大的困難。因此，肺炎鏈球菌疫苗的研制一直是國際上關(guān)注的熱點方向。肺炎鏈球菌疫苗主要有莢膜多糖疫苗、莢膜多糖-蛋白結(jié)合疫苗。但肺炎鏈球菌莢膜多糖是不依賴于T細胞的抗原，對免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善的5歲以下兒童和免疫系統(tǒng)能力下降的65歲以上的老人保護性弱，外加上兒童和老人又是侵襲性感染和粘膜感染的高發(fā)年齡組，所以人們將肺炎鏈球菌莢膜多糖與載體蛋白共價結(jié)合，使莢膜多糖抗原轉(zhuǎn)化成依賴T細胞的抗原，使兒童和老人在注射疫苗后產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生抗體清除致病細菌。因此，目前市場上主要以肺炎鏈球菌莢膜多糖-蛋白結(jié)合疫苗為主。

多價的肺炎鏈球菌莢膜多糖-蛋白結(jié)合疫苗的生產(chǎn)，首先是培養(yǎng)各個亞型的肺炎鏈球菌，培養(yǎng)成熟后通過破碎菌體來提取其莢膜多糖，得到各亞型莢膜多糖后將它們通過化學(xué)法鍵合到載體蛋白上制成糖蛋白結(jié)合疫苗。這類結(jié)合疫苗存在幾點不足之處：(1)通過破碎菌體得到的莢膜多糖非單一物質(zhì)，其莢膜多糖糖鏈長短不一；(2)在提取莢膜多糖的過程中不可避免的會混入破碎的菌體碎片；(3)每個批次結(jié)合疫苗的效果可能不一樣，具有微觀不均一型，產(chǎn)品質(zhì)量難以控制。

中國專利文獻CN105636611A(申請?zhí)?01480051165.X)公開了不含蛋白質(zhì)和肽的綴合物，包含合成的碳水化合物和載體分子，其中所述合成的碳水化合物是與肺炎鏈球菌3型莢膜多糖有關(guān)的碳水化合物而所述載體分子是鞘糖脂。所述綴合物及其藥物組合物可用于免疫與肺炎鏈球菌有關(guān)的疾病，和更特別地與肺炎鏈球菌3型有關(guān)的疾病。然而，由于載體分子是一類小分子化合物--鞘糖脂，導(dǎo)致其生物兼容性較差，免疫記憶持續(xù)時間較短；而目前未有采用免疫原性的生物大分子與肺炎鏈球菌細胞表面3型夾膜多糖的寡聚衍生物相連接的研究，比如白喉類毒素CRM197、破傷風(fēng)類毒素(TT)以及單磷?；闹|(zhì)A等。主要技術(shù)難題是肺炎鏈球菌細胞表面3型夾膜多糖的寡聚衍生物與不同的免疫原性的生物大分子相連后，對其生物活性的影響不可預(yù)知。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對現(xiàn)有肺炎結(jié)合疫苗生產(chǎn)技術(shù)的不足，提供一種肺炎鏈球菌3型莢膜多糖相關(guān)寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用，其中的寡糖是肺炎鏈球菌細胞表面3型夾膜多糖的寡聚衍生物。

本發(fā)明通過如下的技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種肺炎鏈球菌3型莢膜多糖綴合物，結(jié)構(gòu)通式如式(III)所示：

其中，寡糖選自如下式(I)或式(II)之一：