[發明專利]一種用于免疫細胞培養的培養液

在審

• 申請號: 201710323422.6
• 申請日: 2017-05-10
• 公開（公告）號: CN107058223A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 李志遠;王利群;鄧思浩;湯沙;嚴波;楊雅評;郭海江
• 申請（專利權）人: 湖南惠益森細胞基因工程有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種用于免疫細胞培養的培養液。

背景技術

免疫細胞是指參與免疫應答或免疫應答相關的細胞，包括淋巴細胞、樹突狀細胞、單核細胞等。免疫細胞和免疫器官組成免疫系統，保護機體不受侵害。人的免疫力在20歲的時候達到巔峰，40歲時只有巔峰時的1/2，到了70歲更是只剩下巔峰時期的1/10。免疫力下降意味著免疫細胞對抗病毒、細菌以及癌變的能力逐年降低，患病風險也相對提高。

免疫細胞異常，可能引起各種嚴重疾病，如系統性紅斑狼瘡，原因是體內有大量致病性自身抗體和免疫復合物而造成組織損傷。癌癥的發生，原因是腫瘤細胞逃逸免疫細胞的監控而進行無節制的生長。因此將健康時的免疫細胞儲存，以供需要時再擴增并輸回使用，成為當前醫療科技界的新選擇。當發生癌癥等疾病，可用存儲的免疫細胞及時采取免疫細胞療法治療；同時，也可用來提高人體免疫力、抗衰老以及預防腫瘤。

免疫細胞療法是繼手術、放療、化療三大傳統手段后的新支柱性治療手段，旨在激活自身的免疫系統，依靠免疫機能殺滅癌細胞和腫瘤組織的抗癌療法，其最大的優勢在于個體性、安全性、靶向性和高效性。

CIK細胞，即細胞因子誘導的殺傷細胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一種新型的免疫活性細胞，CIK增殖能力強，細胞毒作用強，具有一定的免疫特性。該細胞對腫瘤細胞的識別能力很強，尤其對手術或放化療后患者效果顯著，能消除殘留微小的轉移病灶，防止癌細胞擴散和復發，提高機體免疫力，其在臨床應用中功效已得到充分證實。當CIK細胞在體外擴增至一定數量時，再回輸至患者體內，采用CIK細胞殺傷達到抗腫瘤的目的。因此，CIK細胞被認為是新一代的腫瘤過繼細胞免疫治療的首選方案。

CIK細胞數量和殺傷功能與療效直接相關，研究顯示，隨著抗腫瘤免疫細胞數量增加，對腫瘤的殺傷效果成線性增加。但是目前CIK細胞培養方法，獲得高純度，足夠數量的CIK細胞非常困難。傳統使用的白介素2、IFN-γ純度低(20-30％)，擴增后的CIK細胞殺傷功能低下，不能滿足臨床需求。本發明在基礎培養基基礎上添加自體血漿、人血白蛋白、硫酸慶大霉素、白細胞介素-2、碳酸氫鈉、植酸、維生素C，解決CIK數量和純度的問題，能定向擴增激活CIK細胞，滿足臨床治療需求。

發明內容

本發明實施的目的在于克服上述體外培養中常規培養液培養數量不足、純度低問題，提供一種用于免疫細胞培養的培養基及應用。

本發明提供的用于免疫細胞培養的培養基，包括基礎培養基、自體血漿、人血白蛋白、硫酸慶大霉素、白細胞介素-2、碳酸氫鈉、植酸、維生素C。

所述基礎培養基具體為GIBCOMedium CTS^TM培養基。培養基中含有L-谷酰酰胺，50μg/ml硫酸鏈霉素和10μg/ml硫酸慶大霉素。

附圖說明

圖1為在基礎培養液培養時，培養的免疫細胞在4倍顯微鏡倍數下的生長狀態。

圖2為在本發明的培養液時，培養的免疫細胞在4倍顯微鏡倍數下的生長狀態。

具體實施方案

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下對本發明進行進一步詳細說明，而非限制本發明。

本發明提出一種培養液培養免疫細胞，包括如下步驟：

1、培養基的配置：

1000ml基礎培養液中含有以下成分：

2、人外周血體外分離獲得單核細胞：

1)采集志愿者外周血50ml，抗凝劑為肝素鈉，將采集到的血液在生物安全柜里轉移到新離心管中，500g離心10min，離心完畢后，上層制備自體血漿，下層血細胞分離制備單核細胞。

2)將人外周血血細胞與生理鹽水按照體積比(1-2)：1混合均勻，得稀釋后的細胞懸液，將稀釋后的細胞懸液緩慢加入含淋巴細胞分離液的離心管內，細胞懸液與分離液體積比為(1-2)：1。

3)將離心管轉移至離心機，600g離心20min。

4)用移液管輕輕移去上清液，收集白膜層細胞，并用生理鹽水離心洗滌兩次，即得到外周血單個核細胞。

3、人外周血體外分離獲得自體血漿：

1)采集志愿者外周血50ml，抗凝劑為肝素鈉，將采集到的血液在生物安全柜里轉移到新離心管中，500g離心10min，離心完畢后，上清液轉移到新離心管中，封口膜密封。