[發(fā)明專利]單克隆抗體6C9G4及其在制備治療內毒素血癥的藥物中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710323138.9
• 申請日: 2017-05-09
• 公開（公告）號: CN107245476B
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設計）人: 武藝;陽艾珍
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/38;A61K39/395;A61P31/04;C12N15/06
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒;孫周強

本發(fā)明公開了單克隆抗體6C9G4及其在制備治療內毒素血癥的藥物中的應用，由保藏編號為CCTCC No.C201768的雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體6C9G4有效阻斷HK與LPS的結合，顯著降低血漿中LPS的濃度，并提高動物內毒素血癥的生存率?；趩慰寺】贵w6C9G4的這一作用，本發(fā)明公開的單克隆抗體6C9G4在控制內毒素血癥方面具有潛在的應用前景，為臨床內毒素血癥患者的治療提供了新的途徑和措施。

技術領域

本發(fā)明涉及單克隆抗體6C9G4及其在制備治療內毒素血癥的藥物中的應用。

背景技術

內毒素血癥是是機體感染后，革蘭氏陰性菌釋放出大量內毒素即脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）入血液所導致的病理表現。在美國每年大約有75萬例內毒素血癥患者，其中重度患者和敗血性休克所致死亡率分別是25-30%和40-70%。在我國細菌感染所致內毒素血癥同樣是嚴重危害人民生命的主要疾病，其治療成本為患者帶來巨大的經濟負擔。內毒素血癥的高發(fā)病率和高死亡率的主要原因是當前對其發(fā)病機制仍然認識不清，因此缺乏有效的靶向治療藥物，尤其是抗生素抵抗的耐藥菌的感染已成為臨床棘手的長期難題。因此，面臨這一嚴重迫境，科學家的共識和挑戰(zhàn)是如何確立新的靶點和建立新的干預途徑。

發(fā)明內容

本發(fā)明公開了一種單克隆抗體6C9G4及其在制備治療內毒素血癥的藥物中的應用；可以通過阻斷HK蛋白的第五結構域中的氨基酸序列（簡稱為DHG15）與LPS的結合來阻斷血漿高分子量激肽原（high molecular weight kininogen，HK）與LPS的結合，是治療內毒素血癥發(fā)病的新靶點

本發(fā)明用合成的DHGHKHKHGHGHGKH多肽序列免疫BALB/c小鼠，通過細胞融合雜交瘤技術制備并篩選純化出一株雜交瘤細胞株，從而分泌單克隆抗體6C9G4。本發(fā)明雜交瘤細胞株的制備方法具體包括以下步驟：

（1）將DHG15多肽-KLH 偶聯物抗原用完全佐劑乳化后對8只Balb/c小鼠進行腹腔注射初次免疫，而后分別在第2周，第5周將DHG15多肽-KLH 偶聯物抗原用不完全佐劑乳化后腹腔注射進行加強免疫。第7周鼠尾釆血后收集血清，采用間接ELISA法測定血清效價，效價達標后即可取脾，按照常規(guī)方法進行細胞融合；

（2）從免疫合格小鼠無菌取其脾細胞作為抗原致敏的B細胞，按常規(guī)方法，將B細胞與骨髓瘤細胞株融合，然后利用常規(guī)的融合細胞HAT篩選方法進行篩選，進而獲取融合細胞生長克隆；

（3）采用間接ELISA方法篩選鑒定陽性雜交瘤細胞。采用有限稀釋法將陽性孔細胞進行4次克隆純化，挑選出具有高抗體分泌水平的雜交瘤細胞株，命名為6C9G4。所述雜交瘤細胞株6C9G4保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址是湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學校內，保藏日期是2017年4月26日，保藏編號為CCTCC No. C201768。

采用上述雜交瘤細胞株制備單克隆抗體的方法有以下兩種：

1）在雜交瘤培養(yǎng)液中接種上述雜交瘤細胞，培養(yǎng)后培養(yǎng)液中分離純化所需單克隆抗體；

2）在動物腹腔內接種上述雜交瘤細胞，動物腹水液中分離和純化所需單克隆抗體。

本發(fā)明還公開了由保藏編號為CCTCC No. C201768的雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體6C9G4。

本發(fā)明還公開了利用單克隆抗體6C9G4制備的藥物、試劑或者試劑盒。

本發(fā)明還公開了單克隆抗體6C9G4在制備阻斷血漿高分子量激肽原與脂多糖結合的藥物中應用。

本發(fā)明還公開了單克隆抗體6C9G4在制備治療內毒素血癥的藥物中的應用。

本發(fā)明還公開了單克隆抗體6C9G4的特異性抗原作為靶點在制備治療內毒素血癥的藥物中的應用。