[發明專利]一種棉花耐低鉀種質的鑒定方法

在審

• 申請號: 201710322947.8
• 申請日: 2017-05-09
• 公開（公告）號: CN107219174A
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 王寧;嚴根土;石建斌;許慶華;周紅
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院棉花研究所
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

1.一種棉花耐低鉀種質的鑒定方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將棉花種子平分兩部分，分別進行水培培養和蛭石培養各6天；選擇生長整齊的幼苗，用刀片分別切取水培條件下幼苗中上部根系及蛭石培養條件下主根根系作為待測樣品；

同時，以耐低鉀材料中571和鉀敏感品種新棉99B分別作為耐低鉀對照樣品和鉀敏感對照樣品；

(2)將待測樣品及對照樣品分別先用去離子水沖洗干凈，浸沒于蒸餾水中，再浸入測試液中平衡；

(3)將步驟(2)處理好的待測樣品及對照樣品分別轉入新的測試液中，采用非損傷性微測技術分別測定低鉀脅迫水培培養6天和蛭石培養發苗6天的棉花幼苗的鉀離子流速；

(4)通過比較待測組織樣品與對照樣品的鉀離子流速，判斷所述棉花種子是否為耐低鉀性較強的棉花種質材料。

2.根據權利要求1所述的鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，水培及蛭石培養條件：在光照或鈉燈培養室內進行，光照強度為450μmol m^-2s^-1，光照時間為14h，白天溫度為28±2℃，夜間溫度為20±2℃。

3.根據權利要求1或2所述的鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，所述水培培養條件為：將種子均勻播于用去離子水沖洗過的沙床，上面蓋一層布后再覆薄沙一層，4d后將幼苗轉移至改良的Hoagland營養液中進行低鉀脅迫培養。

4.根據權利要求3所述的鑒定方法，其特征在于，所述改良的Hoagland營養液配方為：2.5mM Ca(NO₃)₂,1mM MgSO₄,0.5mM (NH₄)H₂PO₄,0.1mM Fe-Na-EDTA,0.2μM CuSO₄,1μM ZnSO₄,20μM H₃BO₃,5pM(NH₄)₆Mo₇O₂₄,1μM MnSO₄和0.1mM KCl。

5.根據權利要求1或2所述的鑒定方法，其特征在于，所述蛭石培養條件為：將種子播種于盛有去離子水洗過蛭石的容器中，每天噴水保持蛭石的濕度。

6.根據權利要求1-5任一所述的鑒定方法，其特征在于，所述測試液配方：0.1mmol L^-1KCl、0.1mmol L^-1CaCl₂、0.3mmol L^-1MES，pH 6.0。

7.根據權利要求1-6任一所述的鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，所述水培培養的測定部位為：距幼苗根尖300-600μm，優選300μm處。

8.根據權利要求1-6任一所述的鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，所述蛭石培養的測定部位為：距幼苗根尖600-800μm，優選600μm。

9.根據權利要求1-8任一所述的鑒定方法，其特征在于，步驟(3)中，待測試環境達到穩定狀態后測試時間持續5～8min。