[發明專利]一種高細胞生長密度微藻突變體的篩選方法有效
| 申請號： | 201710321855.8 | 申請日： | 2017-05-09 |
| 公開（公告）號： | CN107058555B | 公開（公告）日： | 2020-12-11 |
| 發明（設計）人： | 劉建華;朱慶玲 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12Q1/683 | 分類號： | C12Q1/683;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈自軍 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 生長 密度 突變體 篩選 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種高細胞生長密度微藻突變體的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將抗性基因轉化微藻，通過固體平板抗性篩選獲得轉入抗性基因序列的突變微藻的單藻落，收集各個單藻落獲得微藻突變體文庫；
(2)從微藻突變體文庫中的每個單藻落取樣，混合后在液體培養基中培養，并連續傳代；
(3)每傳若干代用抗性基因序列特異性的RFLP分析方法檢測，當檢測結果顯示只剩一種微藻突變體時結束篩選，獲得所述高細胞生長密度微藻突變體；當檢測結果顯示還剩2～5種微藻突變體時，使用固體培養基進行單藻落分離獲得所述高細胞生長密度微藻突變體，
傳代時接種密度為OD750為0.1～0.2，傳代次數不少于30次，
步驟(3)中，每傳代5～15次用抗性基因序列特異性的RFLP分析方法檢測，
所述微藻為萊茵衣藻，
所述抗性基因為aadA基因、ble基因、aphⅧ基因或als基因，
RFLP分析時，先用限制性酶進行酶切，再采用Southern法檢測，檢測時用DIG標記的針對抗性基因的探針雜交。
2.如權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述抗性基因為ble基因。
3.如權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述抗性基因轉化微藻使用電轉化法。
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