[發明專利]一種復雜生物基質中內分泌干擾物的檢測方法

有效

• 申請號: 201710318791.6
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN106932518B
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發明（設計）人: 裘文慧;邵海洋;鄭一;鄭焰;鄭春苗
• 申請（專利權）人: 南方科技大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88;G01N30/74
• 代理公司: 北京易捷勝知識產權代理事務所(普通合伙) 11613
• 代理人: 齊勝杰

本發明涉及一種復雜生物基質中內分泌干擾物的檢測方法，包括下述步驟，S1：加速溶劑萃取并復溶，S2：自動凝膠滲透色譜凈化并復溶，S3：固相萃取并復溶，S4：采用液相色譜?質譜聯用分析儀分析溶解液Ⅲ，完成內分泌干擾物的定量檢測。本發明采用加速溶劑萃取?凝膠滲透色譜凈化以及固相萃取技術建立了一生物體中多種EDCs的同時檢測前處理技術，并采用液相色譜?質譜技術建立儀器分析方法，能夠有效檢測復雜生物基質中內分泌干擾物的濃度，實現對生物體中內分泌干擾物的定量分析，該檢測方法容易操作，具有有機溶劑用量少、對待測物的選擇性高、萃取速度快、樣品回收率高等優點，適用于分析含量低且結構復雜的生物體中內分泌干擾物。

技術領域

本發明涉及一種復雜生物基質中內分泌干擾物的檢測技術，特別是一種復雜生物基質中內分泌干擾物的檢測方法。

背景技術

內分泌干擾物(Endocrine Disrupting Chemicals，EDCs)是一類可以干擾生物體或人類內分泌系統的外源性化學物質。已有的研究已發現內分泌干擾物普遍存在環境介質中，包括水、土壤和空氣等各個環境介質中。內分泌干擾物會通過食物鏈網遷移到各個角落并沿著食物鏈呈現放大作用，對人類和動物構成巨大威脅。在人和動物的體液，包括血液、尿液、臍帶血，甚至新生兒的體液中都廣泛檢測出內分泌干擾物的污染，如雙酚A(BPA)、壬基酚(NP)、辛基酚(4-t-OP)和叔丁基酚(4-t-BP)等。加之，毒理學實驗及流行病學調查結果表明，環境中大量存在的EDCs可能危害人類和生物體的內分泌、生殖、神經和免疫系統等的正常功能，并很可能導致生長發育異常、內分泌紊亂、嬰幼兒畸形等，嚴重影響人類的生存與發展。因此，內分泌干擾物的問題引起了世界許多國家政府、相關學者和有關國際組織的高度重視，被視為繼臭氧層破壞、溫室效應之后的又一個全球性的環境問題。

因此，檢測生物體中內分泌干擾物的濃度，是明確內分泌干擾物對生物體污染的前提。但是，很多生物樣品，例如動物的器官，膽汁，血液等，含有很多復雜的生物基質，很難水解完全。加之，大部分EDCs比傳統污染物極性更強，并且在生物中的低濃度，使得檢測分析方法更加困難和復雜，無法實現對生物體中EDCs的定量分析，尤其是多組分同時分析遭遇巨大挑戰。

針對復雜的生物基質，目前關于內分泌干擾物的高效快速檢測方法還鮮有報道。因此，亟需提出一種容易操作，能夠有效檢測復雜生物基質中內分泌干擾物的濃度，實現對生物體中內分泌干擾物定量分析的快速檢測方法。

發明內容

為了克服現有技術的缺陷，本發明的目的在于提供一種復雜生物基質中內分泌干擾物的檢測方法，該檢測方法采用加速溶劑萃取-凝膠滲透色譜凈化、固相萃取以及液相色譜-質譜分析相結合的技術，能夠有效檢測復雜生物基質中內分泌干擾物的濃度，實現對生物體中內分泌干擾物的定量分析，該檢測方法容易操作，具有有機溶劑用量少、對待測物的選擇性高、萃取速度快、樣品回收率高等優點，適用于分析含量低且結構復雜的生物體中內分泌干擾物。

本發明是這樣實現的：

一種復雜生物基質中內分泌干擾物的檢測方法，包括下述步驟：

S1：加速溶劑萃取并復溶：

S11：加速溶劑萃取：稱取待測樣品，將待測樣品置于冷凍干燥機中進行干燥；然后進行研磨，研磨后置于加速溶劑萃取儀萃取池中，并加入同位素內標混合物，在設定好的溫度條件下，采用萃取溶劑提取待測樣品，收集得到溶解有內分泌干擾物的萃取液；

S12：復溶：蒸發掉步驟S11獲得的萃取液中的萃取溶劑，采用復溶溶劑Ⅰ溶解內分泌干擾物，得到溶解液Ⅰ；

S2：自動凝膠滲透色譜凈化并復溶：

S21：自動凝膠滲透色譜凈化：將溶解液Ⅰ進行自動凝膠滲透色譜凈化分析，收集流出組分液；

S22：復溶：蒸發掉S21獲得的流出組分液中的溶劑，采用復溶溶劑Ⅱ溶解內分泌干擾物，得到溶解液Ⅱ；