[發明專利]一種細胞培養基和誘導羊膜間充質干細胞成脂分化的方法

在審

• 申請號: 201710318012.2
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN107460163A
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;戚康藝;張維敏
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 張春水,唐京橋

技術領域

本發明屬于干細胞技術領域，具體涉及一種細胞培養基和誘導羊膜間充質干細胞成脂分化的方法。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是來源于中胚層的多能干細胞，具有高度自我更新能力和多向分化潛能。目前已在多種如羊膜、骨髓、臍帶、肌肉組織、脂肪組織、臍血和牙髓等成熟組織中成功分離并培養出間充質干細胞。羊膜是胎盤包裹胎兒面的一層半透明膜，其表面沒有神經、血管、肌肉和淋巴等組織，可從中分離出羊膜上皮細胞和羊膜間充質干細胞。早在50多年前，科學家和臨床醫生們就已經認識到羊膜擁有一定的生物學作用。早期羊膜曾被用作覆蓋皮膚傷口的敷料，可以抗感染、減輕炎癥的發生，并且抑制細胞的免疫反應，還可以刺激血管的生成，這些特點使它在多種疾病的輔助治療中得到了較為廣泛的應用。

人胎盤羊膜來源的間充質干細胞(human amnion mesenchymal cells,hAMSCs)來自于原條期的胚外中胚層，在一定條件下具有向多個細胞系分化的潛能，向內胚層分化，如肝細胞、胰島樣細胞；向中胚層分化，如成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、心肌細胞；向外胚層分化，如神經細胞等。hAMSCs不僅具有干細胞的特征，還有不排斥性及免疫效果，是細胞移植和組織工程的理想種子細胞。

脂肪細胞應用于美容修復軟組織缺損具有可塑性強、可適應不同缺損形狀的優勢，hAMSCs的成脂誘導潛能，可使其成為美容修復軟組織缺損的干細胞來源。因此，hAMSCs的成脂分化是目前再生醫學和組織工程領域的研究熱點之一，脂肪組織再生技術是重建和修復由老化和病理因素等導致的脂肪組織丟失和損傷的重要技術手段，脂肪細胞作為脂肪再生工程的種子細胞來源， 可大大地驅動新生組織的重建。因此，研發一種新型的誘導羊膜間充質干細胞成脂分化的方法，是本領域技術人員亟待解決的技術問題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種細胞培養基和誘導羊膜間充質干細胞成脂分化的方法，分化周期短。

本發明的具體技術方案如下：

本發明提供了一種細胞培養基，包含：羅格列酮、吡格列酮、胎牛血清、胰島素和基礎培養基。

優選的，所述羅格列酮的工作濃度為0.1～1.0mM。

優選的，所述吡格列酮的工作濃度為5～15μM。

優選的，所述胰島素的工作濃度為5mg/L。

優選的，每100mL所述基礎培養基中包含5mL胎牛血清。

優選的，所述基礎培養基為DMEM-H。

本發明還提供了一種誘導羊膜間充質干細胞成脂分化的方法，采用上述細胞培養基誘導培養羊膜間充質干細胞，獲得脂肪細胞。

優選的，所述羊膜間充質干細胞為第三代至第五代羊膜間充質干細胞。

優選的，所述誘導培養的條件為37℃、5％CO₂。

優選的，所述誘導培養的時間為14～21天。

綜上所述，本發明提供了一種細胞培養基和誘導羊膜間充質干細胞成脂分化的方法，所述培養基包含羅格列酮、吡格列酮、胎牛血清、胰島素和基礎培養基，各組分安全無毒害、配伍合理、協同增效，可促進間充質干細胞脂向分化，將其應用于誘導羊膜間充質干細胞成脂分化，可大大縮短分化時間，提高分化效率。采用上述細胞培養基誘導培養羊膜間充質干細胞，能夠成功實現對羊膜間充質干細胞成脂分化，其成脂效果明顯優于傳統使用地塞米松、胰島素和異丁基甲基黃嘌呤等組成的誘導培養基。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實 施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據提供的附圖獲得其他的附圖。

圖1為實施例1中羊膜間充質干細胞(hAMSCs)表面標記的鑒定結果；

圖2a為實施例2的對照組1中培養至第14天的hAMSCs的油紅染色效果圖；

圖2b為實施例2的對照組1中培養至第21天的hAMSCs的油紅染色效果圖；

圖2c為實施例2的對照組2中培養至第14天的hAMSCs的油紅染色效果圖；

圖2d為實施例2的對照組2中培養至第21天的hAMSCs的油紅染色效果圖；

圖2e為實施例2的實驗組1中培養至第14天的hAMSCs的油紅染色效果圖；

圖2f為實施例2的實驗組1中培養至第21天的hAMSCs的油紅染色效果圖；