[發明專利]一種檢測食品中牛源成分的試劑盒以及檢測方法

在審

• 申請號: 201710317229.1
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN108823318A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 程奇;黃震巨;劉國憲;鮑傳正;苗麗;姜娟娟;韓涌;曹偉;張秀平
• 申請（專利權）人: 杭州眾測生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 向慶寧

本發明提供一種供用于檢測牛源性成分的基因序列，該序列如SEQ ID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。利用這些引物對可以很好的區分肉制品里的具體成分。

技術領域

本發明屬于食品檢測領域和分子生物學技術領域，具體來說，屬于如何采用實時熒光RAA技術并結合特異的引物檢測食品中是否含有牛源成分的方法。

背景技術

近年來，食品安全問題，群眾反映越來越強烈、社會關注度也是越來越高。2016年3月-4月，成都市食品藥品檢驗研究院對海霸王食品有限公司生產的8個批次撒尿牛肉丸進行抽檢，結果全部不合格：部分批次牛肉丸無牛肉、部分批次牛肉丸檢出了鴨成分和豬成分。隨后，該市質量監督管理局執法人員依據不合格檢驗報告對該公司進行了執法檢查，并進行了相關處罰。一些食品生產企業為了一己私利，偷工減料，以次充好，嚴重損害了消費者的利益和人們的生命健康。通常對于生牛肉制品我們可以通過色澤、肌肉紋理和味道等進行鑒定，但是對于經加工的熟肉制品我們很難用這種傳統方法進行鑒定。

重組酶介導擴增(Recombinase-aid Amplification，RAA)技術也是一種在恒溫下可以使核酸快速擴增的方法。與RPA不同的是，RAA擴增法使用的是從細菌或真菌中獲得的重組酶，在37℃恒溫下，該重組酶可與引物DNA緊密結合，形成酶和引物的聚合體，當引物在模板DNA上搜索到與之完全互補的序列時，在單鏈DNA結合蛋白(single-strandedDNAbinding，SSB)的幫助下，使模板DNA解鏈，并在DNA聚合酶的作用下，形成新的DNA互補鏈，反應產物也是以指數級增長，通常在1h內即能得到可以用瓊脂糖凝膠電泳檢測到的擴增片段。在RAA反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監控整個RAA擴增過程，20分鐘內，可實現對起始模板的定量及定性分析。整個反應簡單快速，因為不需要高溫循環，所以特別適合在有大量樣品的非實驗室檢測場所使用，適用于食品快速檢測領域。

發明內容

本發明目的在于，提供一組優選后的檢測食品中牛源性成分的RAA引物對和一條相匹配的熒光探針。

在一些優選的方式中，本發明提供用于檢測牛源性成分的基因序列，該序列如SEQID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。優選的，這些引物利用RAA技術對牛源性成分進行檢測。

本發明的第二個目的是提供一種含有上述引物組和熒光探針，用于檢測食品中牛源成分的試劑盒。在一些具體的方式中，該試劑盒包括RAA必須的試劑以及選自如下一對或者多對的引物序列：SEQ ID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。

本發明的第四個目的是為進行實時熒光定量RAA，檢測食品中摻雜牛源成分的含量提供引物對，這些引物對選自如下一些引物對：SEQ ID NO.1和2所示、如SEQ ID NO.3和4所示、如SEQ ID NO.5和6所示；如SEQ ID NO.7和8所示或如SEQ ID NO.9和10所示的引物。

本發明的技術方案概述如下：一種檢測食品中牛源成分的RAA引物組，其中，該引物對選自下列引物對中的一對或者幾對：1號引物對、2號引物對、3號引物對、4號引物對或5號引物對組成，所述1號引物對的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1和2所示；所述2號引物對的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.3和4所示；所述3號引物對的核苷酸序列分別如SEQ IDNO.5和6所示；所述4號引物對的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.7和8所示；所述5號引物對的核苷酸序列分別如SEQ ID NO.9和10所示。

在一些優選的實施方式中，所處的引物對為，如SEQ ID NO.1和2所示的序列。