[發(fā)明專利]DNA條形碼、引物、試劑盒、方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710316953.2
• 申請(qǐng)日: 2017-05-08
• 公開（公告）號(hào): CN108866221B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田飛;施佳輝;徐平;唐蜀昆;周文婧;高林瑞;高慧英;職曉陽(yáng);丁章貴;童一峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 勐海茶業(yè)有限責(zé)任公司;云南大益微生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京天昊聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11112
• 代理人: 王靜;丁業(yè)平

本發(fā)明屬于物種和菌株鑒定領(lǐng)域，具體涉及一種DNA序列、一種用于鑒別食腺嘌呤節(jié)孢酵母菌株的DNA條形碼、引物、試劑盒、方法和應(yīng)用。該DNA條形碼來(lái)源于食腺嘌呤節(jié)孢酵母TMCC 70007菌株的基因組，并且包含根據(jù)本發(fā)明所述的DNA序列，并且該DNA條形碼的長(zhǎng)度為500bp?2200bp，優(yōu)選為500bp?1600bp，更優(yōu)選為500bp?1000bp。該DNA條形碼能夠準(zhǔn)確鑒別普洱茶發(fā)酵菌株食腺嘌呤節(jié)孢酵母TMCC 70007，可以快速準(zhǔn)確地將該菌株從易混淆的菌株或同物種內(nèi)其他菌株中鑒定出來(lái)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于物種和菌株鑒定領(lǐng)域，具體涉及DNA條形碼、引物、試劑盒、方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

普洱茶是一種具有云南地理標(biāo)識(shí)的后發(fā)酵茶，其采用大葉種曬青毛茶作為原料，經(jīng)過(guò)一系列工藝制作而成。傳統(tǒng)的普洱茶制作過(guò)程為：采摘的新鮮茶葉經(jīng)揉捻、曬青、除雜、潮水、渥堆、晾干、篩分、壓制成型、包裝出廠。在普洱茶的生產(chǎn)中，渥堆發(fā)酵過(guò)程是普洱茶品質(zhì)形成的主要因素，在此過(guò)程中，茶葉中諸如茶多酚、咖啡因以及一些多糖物質(zhì)等內(nèi)含成分發(fā)生了巨大變化，成就了普洱茶的特殊風(fēng)味、口感、品質(zhì)以及各種保健功效。

傳統(tǒng)的普洱生產(chǎn)中，濕熱的環(huán)境激活茶葉本身所含的酶，把茶葉中所含的一部分內(nèi)含成分轉(zhuǎn)化成微生物能利用的物質(zhì)，微生物大量滋生，產(chǎn)生豐富的胞內(nèi)酶和胞外酶，催化茶葉中包含的成分發(fā)生一系列轉(zhuǎn)變，再加上濕熱等其他因素，逐漸形成不同品質(zhì)的普洱茶。不同的產(chǎn)地，因?yàn)槠湮⑸锶郝浣Y(jié)構(gòu)的不同，風(fēng)味及品質(zhì)也各具特色。

普洱茶除了其獨(dú)特的風(fēng)味和文化外，其諸如減肥、降血糖血脂、預(yù)防和改善心血管疾病、抗衰老、抗癌、消炎、助消化以及養(yǎng)胃等保健功效也備受人們關(guān)注。近年來(lái)，普洱茶越來(lái)越受歡迎，逐漸增加的市場(chǎng)需求拉動(dòng)了普洱茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，促進(jìn)了云南地區(qū)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)。

然而，普洱茶也面臨著一些困境，例如產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定、存在一定安全隱患、生產(chǎn)周期長(zhǎng)、勞動(dòng)力投入過(guò)高、微生物數(shù)量超標(biāo)和螨蟲滋生等。隨著人們生活水平的提高，消費(fèi)者對(duì)食品的衛(wèi)生、安全等問(wèn)題日益重視。近幾年食品質(zhì)量安全事件頻發(fā)，茶葉質(zhì)量的安全問(wèn)題也日益突出，除了農(nóng)藥的殘留問(wèn)題之外，渥堆發(fā)酵過(guò)程中微生物也有可能成為影響茶葉質(zhì)量的重要因素。

目前多數(shù)廠家的普洱茶生產(chǎn)仍然是半自然人工渥堆的經(jīng)驗(yàn)式發(fā)酵，雖然渥堆過(guò)程中以食腺嘌呤節(jié)孢酵母(Blastobotrys adeninivorans)等優(yōu)勢(shì)共性微生物為主的群落相對(duì)穩(wěn)定，但產(chǎn)品的穩(wěn)定性還存在較大的提升空間。生產(chǎn)過(guò)程中也不可避免的存在著一定的安全隱患，為了進(jìn)一步獲得消費(fèi)者的青睞和市場(chǎng)的認(rèn)可、突破外貿(mào)壁壘、提升普洱茶企業(yè)的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，必須實(shí)現(xiàn)普洱茶生產(chǎn)工藝的人工可控化、清潔化以及高效化，并不斷開發(fā)新產(chǎn)品、延伸產(chǎn)業(yè)鏈。要做到這些，就必須革新技術(shù)，發(fā)明一系列安全、清潔、高效、人工可控自動(dòng)化的普洱茶新工藝，才能確保普洱茶產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，給國(guó)家和人民帶來(lái)長(zhǎng)遠(yuǎn)利益。

隨著普洱茶科研的進(jìn)一步深入，越來(lái)越多的人們開始了人工接種發(fā)酵普洱茶的探索，目前已經(jīng)有許多菌株應(yīng)用于普洱茶人工可控發(fā)酵。近年由于市場(chǎng)需求加大，許多規(guī)模較小的廠家對(duì)普洱茶缺乏系統(tǒng)深入的研究，大肆濫用許多他人專利進(jìn)行牟利，比如，按照一些接種發(fā)酵普洱茶的專利方法，采用一些菌種進(jìn)行普洱茶發(fā)酵等一系列方法，進(jìn)行普洱茶加工生產(chǎn)等經(jīng)營(yíng)活動(dòng)，大大損害了一些具有相關(guān)專利的普洱茶生產(chǎn)企業(yè)的經(jīng)濟(jì)利益。

為確保普洱茶發(fā)酵微生物種質(zhì)資源得到有效保護(hù)，防止濫用普洱茶發(fā)酵微生物的侵權(quán)行為發(fā)生，解決在普洱茶人工可控發(fā)酵過(guò)程中菌種侵權(quán)時(shí)難以舉證的難題，開發(fā)對(duì)普洱茶發(fā)酵用菌株進(jìn)行快速精準(zhǔn)鑒別的方法勢(shì)在必行，亟需建立其分子鑒定方法，開發(fā)通過(guò)DNA條形碼技術(shù)準(zhǔn)確鑒別與區(qū)分與其相似菌株的方法，以達(dá)到通過(guò)形態(tài)特征與分子數(shù)據(jù)分析相結(jié)合的方法來(lái)解決工業(yè)生產(chǎn)菌株鑒別和鑒定問(wèn)題，為普洱茶有控工業(yè)發(fā)酵工藝開發(fā)和資源保護(hù)提供理論依據(jù)，促進(jìn)普洱茶產(chǎn)業(yè)健康繁榮發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容