[發明專利]一種新型熒光探針及其制備方法和在檢測尿酸中的應用

在審

• 申請號: 201710316865.2
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN107163068A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 王君;楊帆;劉逸倫;張朝紅;宋有濤;任佩佩;劉冠宏
• 申請（專利權）人: 遼寧大學
• 主分類號: C07F5/00
• 分類號: C07F5/00;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司21207
• 代理人: 金春華

技術領域

本發明屬于分析化學領域，尤其涉及新型熒光探針的合成及其對尿酸的檢測。

背景技術

尿酸在人體中是嘌呤的最終代謝產物，在人體尿液以及血液中，尿酸含量的檢測都是非常重要的指標。通常而言，在人體尿液中尿酸的正常濃度應該為1.49-4.46mmol/L，通過各種生物過程維持自身平衡。當尿酸的生成量和排泄量不平衡時，其尿酸的氧化產物嘌呤堿就會發生代謝紊亂，從而導致高尿酸癥、痛風、Lesch-Nyhan綜合癥，如腎臟損傷、白血病、高血壓、糖尿病以及高尿酸癥等等。白血病患者在1d內尿酸最大排泄量可達12g，而正常人1d的尿酸排泄量只有600mg左右。更加可怕的是，最近一些報道證實，高尿酸血癥與妊娠高血壓疾病相關聯，將導致孕婦的死亡。由于缺乏運動，不合理的飲食以及藥物的濫用，導致尿酸含量在體內不斷升高。高尿酸癥在中國已經引起了很高的重視。高尿酸癥是即高血壓、高血脂、高血糖之后被稱為“第四高”的疾病。并且高尿酸癥是與高血壓、高血脂、高血糖等密切相關的代謝綜合征，近年來，此病的發病率呈上升趨勢。因此對尿酸的檢測是至關重要的。

熒光探針就是以熒光物質作為指示劑，并在一定波長光的激發下使指示劑產生熒光，通過檢測所產生的熒光實現對被檢測物質的定性或者定量分析。熒光探針具有靈敏度高，選擇性好，使用方便，成本低，不需預處理，不受外界干擾等優點。特別是在分子生物學、生物化學、醫學等領域中有較廣泛的應用。

發明內容

本發明的目的在于設計合成一種可用于有效檢測尿液當中的尿酸的新型熒光探針Tb^III-dtpa-bis(2,6-Diaminopurine)。本發明所涉及化合物屬于新型熒光探針，將其應用于檢測尿酸操作簡單，成本低，無污染，且選擇性好。

本發明采用的技術方案是：一種新型熒光探針，所述的新型熒光探針是Tb^III-dtpa-bis(2,6-Diaminopurine)。

上述的新型熒光探針的制備方法，方法如下：

1)二乙三胺五乙酸(dtpa)、乙酸酐和吡啶，混合均勻，在60-70℃下，攪拌加熱22-25h，冷卻至室溫，過濾，用乙酸酐和無水乙醚洗滌，抽濾，干燥，得二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)；

2)二乙三胺五乙酸二酐(dtpaa)、三乙胺、無水DMF和2,6-二氨基嘌呤，混合均勻，于95-105℃下，攪拌加熱22-25h，靜置，冷卻到室溫，過濾，真空干燥，得二乙三胺五乙酸-雙(2,6-二氨基嘌呤)(dtpa-bis(2,6-Diaminopurine))；

3)將二乙三胺五乙酸-雙(2,6-二氨基嘌呤)用pH＝7.4的Tris-HCl緩沖溶液溶解，得dtpa-bis(2,6-Diaminopurine)溶液，與Tb(NO₃)₃·6H₂O混合，過濾，濾液于70-80℃下加熱20-30min或于室溫下放置1-2天，得Tb^III-dtpa-bis(2,6-Diaminopurine)。

優選的，上述的新型熒光探針的制備方法，步驟1)，用于反應過程的乙酸酐的加入量為，按摩爾比，二乙三胺五乙酸:乙酸酐:吡啶＝1:4:6。

優選的，上述的新型熒光探針的制備方法，按摩爾比，二乙三胺五乙酸二酐:三乙胺:2,6-二氨基嘌呤＝1:3:2。

優選的，上述的新型熒光探針的制備方法，按質量比，二乙三胺五乙酸-雙(2,6-二氨基嘌呤):Tb(NO₃)₃·6H₂O＝1:0.8-0.85。

本發明的新型熒光探針可應用于檢測尿樣中的尿酸。定性分析方法如下：取尿液，加入上述的新型熒光探針Tb^Ш-dtpa-bis(2,6-Diaminopurine)的pH＝7.4的Tris-HCl緩沖溶液，攪拌均勻，在241nm的激發波長下觀察熒光光譜的變化。

定量分析方法如下：取尿液0.5mL于50mL容量瓶中，加入5mL濃度為5.0×10^-4mol/L的上述新型熒光探針Tb^Ш-dtpa-bis(2,6-Diaminopurine)的pH＝7.4的Tris-HCl緩沖溶液，用Tris-HCl緩沖溶液定容，在241nm的激發波長下觀察熒光光譜的變化。

本發明的有益效果是：