[發明專利]一株攜帶兩個G基因和H基因的重組狂犬病病毒及其應用

在審

• 申請號: 201710316043.4
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN107267531A
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 郭霄峰;趙靜;羅均;龍騰
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/45
• 分類號: C12N15/45;C12N7/01;A61K39/205;A61K39/175;A61P31/14
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明屬于病毒學領域。更具體地，涉及一株攜帶狂犬病病毒雙G基因與犬瘟熱病毒H基因的重組狂犬病病毒及其應用。

背景技術

狂犬病(Rabies)是被人們所熟知存在時間已超過4000年的傳染病，它是由狂犬病病毒(Rabies virus，RABV)引起的一種漸進性、急性的病毒性腦炎。RABV是一種高度嗜神經病毒，狂犬病是一種致命的人獸共患的疫病，一旦出現臨床癥狀，死亡不可避免，目前尚無有效的治療方法。狂犬病的宿主廣泛，幾乎可以感染所有的哺乳動物，包括犬、狼、貓、狐貍、浣熊及蝙蝠等，其中犬是人間狂犬病最主要的傳染源。狂犬病在動物與動物或人之間主要是通過動物咬傷時的唾液傳播，另外動物的抓傷、劃傷、接種未完全滅活的疫苗或帶毒器官的移植等也可能導致感染病毒。盡管已經認識到狂犬病的危害并對其進行了控制，狂犬病仍然在全世界流行，發展成為一個嚴重的世界性的公共衛生問題，據世界衛生組織報道全球37，00-86，000死于狂犬病，因狂犬病而產生的花費大約有6億美元。每年約有1500萬人在被狂犬病疑似動物咬傷后接收了暴露后的疫苗免疫，但仍有很多未能及時進行免疫。因狂犬病導致的死亡病例有95％發生在亞洲和非洲，其中84％發生農村，尤其是孩子中，這對發展中國家來說是健康和經濟的一個嚴重負擔。在中國每年也有不少于2000人的狂犬病病例，預防接種是控制狂犬病的主要途徑。目前，傳統的狂犬病弱毒疫苗成本低廉，但存在毒力殘留或致病性回復突變等安全隱患。而進口疫苗安全性高，免疫效果好，但價格昂貴，難以廣泛推廣使用。

另外，犬瘟熱(Canine distemper，CD)是一種在全世界范圍內流行的病毒性傳染病，它可感染陸地上的絕大多數肉食動物和一些海洋中的哺乳動物。該病具有高度的傳染性，能引起宿主的免疫抑制，容易繼發其他病原體的感染，其臨床狀為上吐下瀉的胃腸道癥狀和流鼻涕、咳嗽、呼吸困難、肺炎等呼吸道癥狀，犬瘟熱病毒(CDV)也可進入神經中樞引起神經癥狀，最終造成感染犬的死亡或耐過。近年來，關于瀕危野生動物群爆發嚴重的CD已多次報道，我國的珍稀野生動物大熊貓報道過感染CD，且造成了多只死亡)。養殖場與野生動物群CD的經常爆發以及家養寵物感染犬瘟熱臨床病例的急劇增加，已給特種經濟動物養殖和養犬業造成巨大的經濟損失，且CD也嚴重威脅著森林中珍稀動物的生存。對犬瘟熱疾病的控制也主要依靠預防手段，但目前市場上應用廣泛的犬瘟熱疫苗存在包括熱穩定性差、免疫效果易受母源抗體干擾等多重問題。

因此，研制安全、有效、成本低廉的動物狂犬病疫苗，以及的新型犬瘟熱疫苗，仍具重要的現實意義。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有狂犬病疫苗和犬瘟熱疫苗的缺陷和不足，借助分子生物學技術，利用狂犬病弱毒株HEP-Flury和犬瘟熱疫苗株Onderstepoort株的基因和蛋白特性，在實驗室反向遺傳的平臺上，拯救得到一株能夠同時高效表達RABV-dG跟CDV-H蛋白的毒株HEP-dG(H)，是一株有潛力的狂犬病毒和犬瘟熱病毒重組二聯疫苗候選株，能夠誘導產生較高的抗狂犬病病毒和犬瘟熱病毒的抗體，對免疫動物起到較好的保護。

本發明的目的是提供一種攜帶兩個G基因和H基因的重組狂犬病病毒，即一種狂犬病和犬瘟熱病重組二聯疫苗。

本發明另一目的是提供所述重組狂犬病病毒在作為或制備狂犬病疫苗和/或犬瘟熱病疫苗中的應用。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

一株市場上廣泛應用的CDV疫苗株Onderstepoort的H基因，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.1所示。

該基因是從市場上廣泛應用的一株CDV疫苗擴增得到，其表達的H蛋白免疫動物后會刺激機體產生的中和抗體抵抗CDV的侵襲。

一株攜帶兩個G基因和H基因的重組狂犬病病毒HEP-dG(H)，其特征在于，是以狂犬病病毒HEP-Flury株為骨架，在狂犬病病毒(dG株)基因組G與L之間再插入SEQ ID NO.1所示的H基因，構建出攜帶兩個G基因和H基因的重組質粒pHEP-dG(H)，并利用狂犬病的反向遺傳操作系統拯救篩選出能同時表達狂犬病病毒雙G蛋白和犬瘟熱病毒H蛋白的重組狂犬病病毒HEP-dG(H)。