[發明專利]用于兒童安全用藥相關基因檢測的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201710315310.6
• 申請日: 2017-05-08
• 公開（公告）號: CN107523612A
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 韓林志;肖芳
• 申請（專利權）人: 韓林志
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及體外診斷技術領域，特別的，涉及一種用于兒童安全用藥相關基因檢測的引物組、試劑盒及方法。

背景技術

藥物作為外源性的活性物質，在進入機體內時首先要將其滅活，同時還要促其自體內消除。體內的藥物主要在肝臟經生物轉化失去藥理活性及少數被活化，變為極性高的水溶性代謝產物進一步被排出體外。而藥物的生物轉化則有賴于藥物代謝酶的催化。

藥物代謝酶包括參與Ⅰ相代謝的細胞色素氧化酶CYP450超家族(CYP1A1/2、1B1、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1、3A4/5/7)、乙醛脫氫酶(ALDH)、乙醇脫氫酶(ADH)、二氫嘧啶脫氫酶(DPD)等和參與Ⅱ相代謝的N-乙?；D移酶(NAT1/2)、尿苷三磷酸葡糖醛酸基轉移酶(UGT)、硫嘌呤甲基轉移酶(TPMT)等。其中細胞色素氧化酶CYP450是一組結構和功能相關的超家族基因編碼的同工酶，參與大多數內源性物質(如脂肪酸、維生素、膽酸)的代謝，外源性物質(如藥物)的解毒，前致癌物質(如芳香類物質)的激活，在藥物代謝中發揮重要的作用。

許多藥物代謝酶的遺傳多態性具有顯著的功能意義，導致人群對其底物的代謝出現顯著的個體差異，常見藥物代謝酶及代謝藥物，參見表1。

表1重要的CYP450酶的代謝底物

藥物代謝酶的遺傳多態性可導致作為其底物的藥物的藥理學作用增強或延長；發生藥物不良反應或不良反應加重；不能使前藥代謝生成活性產物而產生藥理作用、藥物有效劑量降低；藥物經由其他代謝途徑的代謝率代償性提高；藥物相互作用增強。

其中，本發明研究的CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4、CYP2D6及CYP3A5基因具有明顯的遺傳多態性，在藥物代謝中發揮重要的中作用，涉及三大類兒童常用藥物：即兒童解熱鎮痛類藥品、兒童消化系統類藥品、兒童抗感染類藥品(參見表2)。因此，通過對CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP3A4*1G、CYP2C9*3、CYP2D6*10及CYP3A5*3位點的基因多態性檢測，可以進行臨床用藥方案的輔助，為臨床兒童安全用藥提供依據，預防藥物的不良反應等。

表2與CYP450酶相關的兒童藥物

目前常采用的基因多態性檢測技術主要包括測序法和熒光法。測序法存在操作繁瑣、耗時長、靈敏度低等缺點，限制了其在臨床實驗室的快速準確篩查。本發明的目的是提供一種具有完善質控，檢測快速、準確的用于CYP2C19*2/*3、CYP2C9*3、CYP2D6*10、CYP3A4*1G及CYP3A5*3基因多態性檢測的試劑盒。本發明采用TAQMAN等位基因技術與熒光PCR技術相結合的檢測試劑盒，適用于臨床推廣和產業化。

發明內容

為了解決傳統臨床經驗醫療方式診斷及用藥時兒童易出現臨床用藥不良反應的技術問題，本發明提供一種操作簡單、檢測快速、準確性高及特異性好的用于兒童安全用藥相關基因檢測的引物組、試劑盒及其方法。

本發明提供了一種用于兒童安全用藥相關基因檢測的引物組，包括針對CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP3A4*1G、CYP2C9*3、CYP2D6*10及CYP3A5*3基因位點的特異性引物及探針，如下：

CYP2C19*2正向引物：

5'-CTTAGATATGCAATAATTTTCCCACTATCA-3'(SEQ ID NO.1)；

CYP2C19*2反向引物：

5'-CCAAAATATCACTTTCCATAAAAGCAAGG-3'(SEQ ID NO.2)；

CYP2C19*3正向引物：

5'-TGAATGAAAACATCAGGATTGTAAGC-3'(SEQ ID NO.3)；

CYP2C19*3反向引物：

5'-AAGTGGTTTCTCAGGAAGCAAAAA-3'(SEQ ID NO.4)；

CYP3A4*1G正向引物：

5'-GGTTTCACCTCCTCCCTCCTT-3'(SEQ ID NO.5)；

CYP3A4*1G反向引物：

5'-GAAATTGATGCAGTTTTACCCAATAA-3'(SEQ ID NO.6)；

CYP2C9*3正向引物：

5'-CCTGCATGCAAGACAGGAGC-3'(SEQ ID NO.7)；

CYP2C9*3反向引物：