[發(fā)明專利]一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710315041.3
• 申請日: 2017-05-07
• 公開（公告）號: CN106990236A
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方敏
• 申請（專利權(quán)）人: 莆田方家鋪子食品營養(yǎng)研究中心
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577
• 代理公司: 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)11531
• 代理人: 李宏偉

1.一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法，其特征在于，所述方法包含以下步驟：

(1)抗AFB1單克隆抗體的制備與純化：將穩(wěn)定分泌抗AFB1單克隆抗體的雜交瘤細胞株2A5接種于BALB/c小鼠腹腔，通過體內(nèi)誘生制備抗AFB1的腹水抗體，然后將所述腹水抗體采用親和層析純化得高純度的抗AFB1單克隆抗體；

(2)膠體金免疫層析檢測體系的制備：采用還原劑還原HAuCl₄水溶液制備膠體金，將所述膠體金與所述步驟(1)中抗AFB1單克隆抗體混合均勻得金標AFB1單克隆抗體，作為分析探針；將作為檢測線的AFB1-BSA偶聯(lián)物和作為質(zhì)控線的羊抗鼠IgG分別包被在硝酸纖維素膜上，建立AFB1的膠體金免疫層析檢測體系；

(3)大米樣品溶液AFB1的檢測：制備大米樣品溶液，緩慢滴加于所述步驟(2)中分析探針上，依據(jù)檢測條件，觀察檢測線和質(zhì)控線的顏色變化，當樣品中AFB1濃度低于限值時，檢測線和質(zhì)控線均為紅色；高于限值時，僅質(zhì)控線為紅色。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法，其特征在于，所述膠體金制備方法包括:取0.01wt％HAuCl₄水溶液100ml，加熱煮沸30min，迅速加入1wt％還原劑枸櫞酸三鈉水溶液0.75ml-4ml，繼續(xù)煮沸約5min，出現(xiàn)橙紅色；所述膠體金顆粒粒徑為15nm-50nm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法，其特征在于，所述膠體金顆粒粒徑為20nm-25nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法，其特征在于，所述的金標AFB1單克隆抗體中所述抗AFB1單克隆抗體和所述膠體金的標記量為15μg：1mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法，其特征在于，所述大米樣品溶液的制備方法包括：稱取粉碎均質(zhì)后的大米樣品2.0g，置50ml離心管中，加入洗脫劑3-6ml，旋渦混合4min，在4000r/min下離心4min，精密量取上清液1ml，過0.2um濾膜即得。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法，其特征在于，所述洗脫劑包含甲醇、乙酸乙酯、乙腈中的一種。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種大米中黃曲霉毒素B1的膠體金免疫層析檢測方法，其特征在于，所述檢測條件包括：標記pH值為7.5，所述AFB1-BSA偶聯(lián)物濃度為10μg/mL，所述羊抗鼠IgG為原液時，肉眼判定AFB1檢測限值為10ng/mL，檢測時間為10-15min；當樣品中不含有AFB1或AFB1含量低于10ng/mL，所述檢測線和質(zhì)控線呈現(xiàn)紅色條帶，測試樣品為陰性；當樣品中AFB1含量超過10ng/mL，所述質(zhì)控線呈現(xiàn)紅色條帶，測試樣品為陽性。