[發明專利]一種天目不動桿菌MCDA01及其制備幾丁質脫乙酰酶的方法

有效

• 申請號: 201710310979.6
• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號: CN106929456B
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 劉姝;王淑軍;房耀維;呂明生;焦豫良;顧張慧;胡晟源;來蔣麗
• 申請（專利權）人: 淮海工學院;江蘇省海洋資源開發研究院（連云港）
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/80;C12R1/01
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 何文豪

1.一種天目不動桿菌MCDA01，其特征在于，該菌株為天目不動桿菌(Acinetobacterschindleri)MCDA01，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO.13538。

2.一種天目不動桿菌MCDA01制備幾丁質脫乙酰酶的方法，其特征在于：所述天目不動桿菌MCDA01選自保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC NO.13538的天目不動桿菌(Acinetobacter schindleri)MCDA01，具體步驟如下：

(1)配制2216E液體培養基、種子培養基、發酵培養基，其中

2216E液體培養基組成分為：蛋白胨0.5％，酵母粉0.1％，FePO₄ 0.01％，瓊脂2％，陳海水配置；

種子培養基組成成分為：酵母粉0.1％，蛋白胨0.5％，NaCl1％，陳海水配置；

發酵培養基組成組分為：蛋白胨0.5％，葡萄糖0.2％，NH₄SO₄ 0.3％，KH₂PO₄ 0.15％，MgSO₄ 0.05％，粉末幾丁質1％，陳海水配制；

(2)將菌株MCDA01接種至步驟(1)中的2216E液體培養基中斜面種子培養，并用篩選培養基篩選目標菌種，

(3)將上述步驟(2)中獲取的斜面種子接種至種子培養基中進行搖瓶培養，培養完成后將其以1000r/min離心10min，取上清液即為種子液，

(4)將上述步驟(3)中獲取的種子液以1％接種量接種至發酵培養基進行搖瓶培養，制備幾丁質脫乙酰酶，

(5)每間隔2h取上述步驟(4)中樣品進行測定幾丁質脫乙酰酶活力，其中設置沸水浴滅活15min的酶液對照組。

3.根據權利要求2所述的一種天目不動桿菌MCDA01制備幾丁質脫乙酰酶的方法，其特征在于：所述步驟(1)和(2)中2216E液體培養基pH值為7.0，斜面培養48h，獲得的斜面種子能夠使篩選培養基產生黃色圈。

4.根據權利要求2所述的一種天目不動桿菌MCDA01制備幾丁質脫乙酰酶的方法，其特征在于：所述步驟(3)中種子液搖瓶培養條件為裝液量20％，轉速為180r/min，溫度5℃-45℃，pH值為3.0-11.0，NaCl濃度為0％-10％，時間為0-24h。

5.根據權利要求2所述的一種天目不動桿菌MCDA01制備幾丁質脫乙酰酶的方法，其特征在于：所述步驟(4)中發酵培養條件為裝液量20％，發酵時間2h-96h，溫度10℃-30℃，發酵起始pH值為4.0-10.0，選用1％-5％的幾丁質為誘導劑。

6.根據權利要求2所述的一種天目不動桿菌MCDA01制備幾丁質脫乙酰酶的方法，其特征在于：所述步驟(2)中篩選培養基組分為：膠體幾丁質0.2％，K₂HPO₄0.07％，KH₂PO₄0.03％，MgSO₄0.05％，對硝基-N-乙酰苯胺0.02％，陳海水配置，所述篩選培養基pH值為7.0。

7.根據權利要求2所述的一種天目不動桿菌MCDA01制備幾丁質脫乙酰酶的方法，其特征在于：所述步驟(5)中酶活力的鑒定，試管中加入30℃預保溫的0.05mol/L、pH值為7.0磷酸緩沖液3mL，200mg/L的對硝基乙酰苯胺水溶液1mL，酶液1mL，于30℃水浴反應15min，沸水浴終止酶促反應，3000r/min離心10min，測定上清液的吸光度。