[發(fā)明專利]茶葉成分在抑制炎癥方面的應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2017-05-05
• 公開（公告）號(hào): CN107343886A
• 公開（公告）日: 2017-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫世利;周利君;賴幸菲;曾煒杰;孫伶俐;談智;黎秋華;許雅南;向麗敏
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所;中山大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/198
• 分類號(hào): A61K31/198;A61P29/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司44102
• 代理人: 林瑞云

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及基于茶葉成分抑制炎癥的方法。

背景技術(shù)

巴豆油所致耳腫脹模型是一種常用的炎癥模型，多用于抗炎藥物的研究，其中主要致炎成分是佛波酯(TPA)。TPA可致病理和生物化學(xué)變化，包括血管通透性的改變，炎癥細(xì)胞的聚集，巨噬細(xì)胞的激活，炎癥介質(zhì)的釋放增加，以及促進(jìn)炎癥細(xì)胞DNA、RNA的合成。

在現(xiàn)有技術(shù)中，陸彩鵬等(華西藥學(xué)雜志，2014,29(5)：609-610)研究表明，亞油酸及其甲酯能有效抑制巴豆油所致小鼠耳腫脹，具有一定抗炎作用；陳一村等(汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010,23(1):7-9)研究表明，海灘牽牛有效部位具有較強(qiáng)的抗炎活性，對(duì)巴豆油所致小鼠耳腫脹有明顯減輕作用。

目前，對(duì)巴豆油所致小鼠耳腫脹抑制效果的研究中，還未有關(guān)于茶氨酸抑制效果的研究，而茶氨酸在茶葉中含量是其干重的1%-2%，游離氨基酸的40%-70%，并且具有一些特殊的生理功能，如鎮(zhèn)靜和舒緩神經(jīng)、增強(qiáng)學(xué)習(xí)和記憶、降血壓、抗腫瘤、抗疲勞、提高人體免疫力等功能，使其成為茶葉功能成分研究與利用的又一大熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題與不足，本發(fā)明提供了一種利用茶葉中茶氨酸(THN)對(duì)TPA誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹炎癥的抑制方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所才有的技術(shù)方案如下：

基于茶葉成分抑制炎癥的方法，所述方法如下：

向帶有炎癥的哺乳動(dòng)物受試者給予有效量的茶氨酸，并涂抹于患處。

特別地，所述茶氨酸為單體，可于市面直接購買，或從茶葉中提取分離。

特別地，所述受試者為4-6周齡雌性ICR小鼠。

特別地，茶氨酸，作為治療或抑制炎癥的藥劑。

特別地，茶氨酸，在治療或抑制因TPA誘導(dǎo)的哺乳動(dòng)物耳腫脹炎癥方面的應(yīng)用。

本發(fā)明要解決的第二個(gè)問題是：茶氨酸抑制因TPA誘導(dǎo)的哺乳動(dòng)物耳腫脹炎癥的機(jī)理。通過Western blot法檢測小鼠耳片中COX2蛋白表達(dá)量的變化，以及免疫熒光法檢測炎癥因子IL-1β和TNF-α，結(jié)果表明，茶氨酸THN是通過調(diào)控COX2蛋白表達(dá)，抑制炎癥因子IL-1β和TNF-α的表達(dá)而抑制TPA誘導(dǎo)的耳腫脹炎癥。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，提供了一種新的抑制炎癥的方法和研究理論，通過對(duì)動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，顯示本方法具有顯著的抗炎效果；此外，利用從茶葉中提取茶氨酸進(jìn)行研究與開發(fā)，對(duì)于茶葉功能更進(jìn)一步深入研究具有重要意義和價(jià)值。

附圖說明

圖1為小鼠耳片處理前后，耳片腫脹程度隨時(shí)間的變化趨勢。

圖2為小鼠耳片處理前后，兩耳片的厚度和重量差值。

圖3為小鼠耳片處理前后耳片外觀圖。

圖4為小鼠耳片病理結(jié)構(gòu)的HE染色圖。

圖5為小鼠耳片中COX2蛋白表達(dá)量。

圖6為小鼠耳片IL-1β(上)和TNF-α(下)炎癥因子表達(dá)水平。

具體實(shí)施例

以下實(shí)施例為本發(fā)明的一些舉例，不應(yīng)視為是對(duì)本發(fā)明的限定。

將4周齡的雌性ICR小鼠在動(dòng)物房飼養(yǎng)穩(wěn)定2周后，60只小鼠隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為：空白組（丙酮水溶液），TPA模型組（TPA+丙酮水溶液），陽性對(duì)照組（TPA+地塞米松+丙酮水溶液），低/中/高劑量實(shí)驗(yàn)組（TPA+茶氨酸+丙酮水溶液）。

小鼠右耳朵內(nèi)外兩側(cè)分別涂上20μL 50%丙酮溶液或不同濃度茶氨酸+50%丙酮溶液20μL，20 min后再涂上20μL TPA丙酮溶液（2.5μg/20μl），6 h后將小鼠處死，拍攝兩耳紅腫程度，游標(biāo)卡尺測量兩耳厚度，兩耳打孔，孔徑為6 mm，取耳片組織并稱重。每組隨機(jī)選4只小鼠右耳片組織浸泡于福爾馬林溶液中固定，按常規(guī)石蠟包埋、切片、HE 染色后于顯微鏡上觀察拍片。每組剩下6只小鼠右耳片組織儲(chǔ)存在-80℃作Elisa或Western blot分析。

實(shí)施例1

基于茶葉成分抑制炎癥的方法，步驟如下：

向ICR小鼠右耳朵內(nèi)外兩側(cè)涂上2.5μgTPA+茶氨酸+20μL 50%丙酮水溶液。

特別地，所述茶氨酸為單體，可于市面直接購買。

實(shí)施例2 不同濃度茶氨酸對(duì)炎癥抑制作用影響