[發明專利]一種法尼基修飾的半胱氨酸多肽的制備方法

有效

• 申請號: 201710309285.0
• 申請日: 2017-05-04
• 公開（公告）號: CN107417771B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 王錫平;李廣歡
• 申請（專利權）人: 蘇州強耀生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/113;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發明提供一種法尼基修飾的半胱氨酸多肽的制備方法，采用半胱氨酸特殊保護基4?甲氧基三苯甲基及特定脫除條件，可定點，專一脫除半胱氨酸保護基而不對其他氨基酸保護基作用，僅半胱氨酸巰基游離，并作為唯一反應位點，從而避免副反應的發生，采用反,反?法尼基溴作為法尼基修飾原料，可于固相體系中簡單、高效的實現半胱氨酸法尼基修飾，從而達到合成目標產物的目的，工藝簡單，結構確定，雜質少，利于純化，收率高。

技術領域

本發明涉及多肽技術領域，尤其涉及法尼基修飾的半胱氨酸多肽的合成方法。

背景技術

法尼基半胱氨酸英文名稱farnesylcysteine法尼基半胱氨酸蛋白質分子(如G蛋白的γ亞基)中半胱氨酸殘基經法尼基修飾后的衍生物,可幫助蛋白質定位于細胞質膜的內表面，30％人類腫瘤皆與Ras基因突變、Ras蛋白表達水平增高有關。Ras蛋白在法尼基修飾后才能定位于細胞膜內側，從而發揮促進生長的作用，導致腫瘤細胞惡性增殖。這一過程的關鍵步驟是在法尼基轉移酶(FTase)的催化作用下，Ras蛋白羧基端的CaaX(CaaX的組成中C為Cys，a為疏水性氨基酸，X為甲硫氨酸和絲氨酸等)被法尼基化。

根據法尼基轉移酶的結構分析和催化機理研究，法尼基轉移酶抑制劑以法尼基轉移酶為作用靶點抑制修飾酶作用，從而抑制Ras突變性腫瘤以及一些Ras上游某種蛋白過度表達的腫瘤細胞生長,對正常的細胞則無明顯毒性。法尼基轉移酶抑制劑的研究主要集中在下4類化合物：(一)CaaX四肽及其模擬物；(二)法尼基焦膦酸酯(FPP)模擬物；(三)雙底物模擬物；(四)天然產物。其中含CaaX四肽的化合物反應專一性好，酶識別能力強，利于較為系統的研究，并進行生物活性評價。

因此，能抑制法尼基轉移酶的活性、阻止Ras蛋白的CaaX端基法尼化的化合物，將是一類具有潛在應用價值的抗癌藥物，法尼基轉移酶抑制劑成為藥物分子設計的新靶點，引起了國外許多著名藥物研究機構和藥物公司的關注。

鑒于CaaX端基法尼化的多肽在生物醫學領域的應用前景，本發明針對可作為法尼基轉移酶抑制劑的CaaX端基法尼基化的多肽作為發明立足點，目的在于發明一種簡單、高效的合成工藝路線及合成方法，實現CaaX端基法尼基化的多肽的合成。

處于此種目的，我們在研究相關合成工藝的過程中發現，現有技術工藝較為復雜，耗時較長。該技術主要采用先合成純化得到含游離巰基的多肽，再進行半胱氨酸法尼基修飾，序列中的其他氨基酸中活性基團無保護，易于發生其他副反應，此種方法難以確定法尼基反應位點，另外還需要嚴格控制投料比例，避免多余原料產生的雜質；根據反應原理，過程中需添加堿性試劑以促進反應的進行，而在堿性反應體系游離的巰基易于氧化從而產生二聚體雜質，阻礙法尼基修飾的進行；反應結束后還需進行后處理，提取出目標產物，過程繁瑣；較多的副反應和反應位置的不確定為后期純化和鑒定造成極大的困難，影響最終的收率和結構的確定。

有鑒于上述的缺陷，本設計人，積極加以研究創新，以期創設一種法尼基修飾的半胱氨酸多肽的制備方法，使其更具有產業上的利用價值。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的是提供一種法尼基修飾的半胱氨酸多肽的制備方法，該方法能夠克服現有技術的缺陷，且簡單、高效。

本發明的法尼基修飾的半胱氨酸多肽的制備方法，包括以下步驟：

(1)將Wang Resin與活化后的氨基酸Fmoc-Ser(tBu)-OH在溶劑中發生反應，得到氨基酸序列如下的多肽片段：

Fmoc-Ser(tBu)-Resin。

(2)脫除步驟(1)中得到的連接有氨基酸的樹脂Fmoc保護基，得到氨基酸序列如下的多肽片段：

H-Ser(tBu)-Resin。

(3)將步驟(2)中得到的H-Ser(tBu)-Resin與保護氨基酸Fmoc-Ile-OH發生耦合反應，得到氨基酸序列如下的多肽片段：