[發明專利]一種培育無刺黑果枸杞的方法

有效

• 申請號: 201710307900.4
• 申請日: 2017-05-04
• 公開（公告）號: CN107223563B
• 公開（公告）日: 2019-12-06
• 發明（設計）人: 王欽美;張志宏;張桐欣;劉俞帆;吳月亮;朱明;周永斌
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 21101 沈陽科威專利代理有限責任公司
• 代理人: 張述學<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種培育無刺黑果枸杞的方法，其特征是培育步驟如下：

(1)無性系組培苗的獲得

以有刺黑果枸杞的莖或成熟種子為原始供體材料，采用莖或葉為外植體培養獲得無菌組培苗；

(2)壯苗培養

將上步獲得的組培苗接種于改良的1/4或1/2MS固體培養基，置于自然日光下進行壯苗培養；改良的1/4MS固體培養基，是除了KH₂PO₄ 和KNO₃的含量與MS培養基一樣，其它大量元素、微量元素、鐵鹽及有機物質含量均為MS培養基1/4的一種培養基；而改良的1/2MS固體培養基是除了KH₂PO₄ 和KNO₃的含量與MS培養基一樣，其它大量元素、微量元素、鐵鹽及有機物質含量均為MS培養基1/2的一種培養基；改良的1/4和1/2MS固體培養基的蔗糖濃度為15～20 g/L,瓊脂濃度為4.3～7.0 g/L,pH值為5.4～5.8；

（3）煉苗及移栽

生根完整小植株在壯苗培養之后進行移栽馴化；移栽介質采用菜園土、腐殖土、沙子、草炭其一或其兩種以上混合物；移栽介質121℃高壓滅菌30 min～2 h；將壯苗之后的帶根植株沖洗干凈，并迅速置于多菌靈或甲基托布津工作液中浸泡5～10 min；之后將苗栽植于盆缽中的移栽介質中，澆透蒸餾水之后覆蓋帶孔塑料膜或帶孔保鮮膜保濕；剛移栽的組培苗要置于散射光下，避免日光直射；定期澆蒸餾水使栽培介質的含水量保持在100%田間持水量，從移栽第5～10天開始逐漸揭去保鮮膜或塑料膜；待植株明顯開始生長之時再逐漸挪到自然日光下；整個過程的盆土含水量均要保持在80%～100%田間持水量，環境溫度保持在18～28℃；

（4）盆栽控水處理及澆灌營養液

對移栽馴化成活的健康盆栽組培苗進行控水處理并定期澆灌1/8改進的MS營養液或1/4改進的MS營養液：每日澆水，使土壤含水量保持在75%～100%田間持水量；間隔10～30天澆灌一次營養液，澆灌營養液的同時要保證土壤含水量與原先設置的相同，即75%～100%田間持水量；盆苗置于日光下，環境溫度保持在18～28℃；此步提到的改進的MS營養液不含蔗糖和瓊脂；其大量元素及鐵鹽含量與MS培養基相同；不含硫酸銅和氯化鈷,但其它微量元素的含量為MS培養基的1/2；不含肌醇和甘氨酸，但其它有機物質的含量與MS培養基相同；1/8改進的MS營養液的各種物質含量為改進的MS營養液的1/8；1/4改進的MS營養液的各種物質含量為改進的MS營養液的1/4。

2.根據權利要求1所述的培育無刺黑果枸杞的方法，其特征是以有刺黑果枸杞的莖段為最初的外植體培養無菌組培苗：采集溫室內的有菌有刺黑果枸杞莖，在無菌超凈工作臺用70-75%體積比酒精浸泡莖段30 S～1 min，再用0.1～0.2%質量體積比的氯化汞水溶液或者2%質量體積比次氯酸鈉溶液浸泡2～5 min，無菌水沖洗3～6遍；將1～3 cm長的莖段接種到添加 6-BA 0.05～1.0 mg/L+NAA 0～0.5 mg/L的1/2MS或MS固體培養基上，20～28℃每天8～16小時光照培養；待接種的莖段腋芽萌發出嫩枝之后，采集嫩枝的葉片或莖段為外植體：將生長良好的幼葉片橫向剪或切為直徑3～5mm的小塊，接種到含6-BA 0.05～1.0 mg/L+NAA 0～0.5 mg/L的MS固體培養基上，20～28℃下置于微弱散射光下培養1～4周；之后轉到正常光照下培養，每天光照8～12 h；將莖剪切為0.5～2 cm的小段，下端朝下插入含6-BA0.05～1.0 mg/L+NAA 0～0.5 mg/L的MS固體培養基上，20～28℃下每天光照8～12 h；或者將萌發嫩枝插于生根培養基，獲得生根小植株之后，再取其莖、葉作為外植體來培養無性系；繼續采集無菌無性系的幼嫩莖和葉為外植體，通過離體培養獲得次生無性系；用到的MS固體培養基添加0.43～0.7%質量體積比的固化劑瓊脂，3～4%質量體積比的蔗糖；121℃高壓滅菌15～20min之前用NaOH或KOH溶液將pH值調節到5.4～5.8；1/2MS固體培養基添加蔗糖、大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物質濃度均為MS固體培養基的一半，瓊脂含量、pH值及滅菌條件與MS培養基一致。