[發(fā)明專利]土木香倍半萜內(nèi)酯有效部位的制備方法及其在抗胰腺癌方面的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710306905.5
• 申請(qǐng)日: 2017-05-04
• 公開（公告）號(hào): CN107115339A
• 公開（公告）日: 2017-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林能明;張博;閻優(yōu)優(yōu)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州市第一人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K31/365
• 分類號(hào): A61K31/365;A61K36/28;C07D307/92;A61P35/00
• 代理公司: 嘉興海創(chuàng)專利代理事務(wù)所(普通合伙)33251
• 代理人: 鄭文濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體是一種土木香倍半萜內(nèi)酯有效部位的制備方法及其在抗胰腺癌方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

菊科(Asteraceae)旋覆花屬(Inula L.)植物約有100余種，主要分布于歐洲、非洲及亞洲，以地中海地區(qū)為主。我國(guó)旋覆花屬有20余種和多個(gè)變種，其中一部分是廣泛分布種；我國(guó)的特有種主要集中于西部和西南部。旋覆花屬多個(gè)種植物常供藥用。

土木香(Inula helenium L.)為菊科旋覆花屬植物，在我國(guó)具有多年用藥歷史，現(xiàn)被我國(guó)2015版藥典收載。土木香，味辛、苦、溫，歸肝、脾經(jīng)，具有健脾和胃、行氣止痛等功效，常用于胸脅、脘腹脹痛，嘔吐瀉痢，胸脅挫傷，岔氣作痛，胎動(dòng)不安等治療。

土木香含有多個(gè)倍半萜內(nèi)酯類成分，且為其指標(biāo)性有效成分，2015版藥典規(guī)定，土木香以干燥品計(jì)算，含土木香內(nèi)酯及異土木香內(nèi)酯的總和不得低于2.2％。迄今為止，雖然文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)菊科旋覆花屬植物進(jìn)行了較系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，已從該屬多個(gè)種的藥用植物中，提取、分離得到了一系列倍半萜內(nèi)酯類化合物，并且鑒定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)；文獻(xiàn)亦報(bào)道了多個(gè)倍半萜內(nèi)酯類化合物的多種生物活性，如：驅(qū)蟲作用，抗菌作用等。但迄今未有對(duì)菊科旋覆花屬植物中含有的倍半萜內(nèi)酯類成分的有效部位的研究報(bào)道，亦沒有提供一種工藝科學(xué)合理，有效部位性能穩(wěn)定、藥效物質(zhì)較明確、生物活性高的土木香倍半萜內(nèi)酯有效部位的制備方法，及其在臨床較難治療的胰腺癌方面的應(yīng)用。

目前，在提取溶劑及方法方面，文獻(xiàn)“土木香化學(xué)成分的研究”(趙永明；土木香化學(xué)成分的研究；天然產(chǎn)物研究與開發(fā)；2009年第21卷)公開了土木香中倍半萜內(nèi)酯類成分的提取方法，該研究用99％的乙醇回流提取。99％的乙醇在提取土木香脂溶性較強(qiáng)的倍半萜內(nèi)酯方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，且能最大限度避免極性較大的非倍半萜內(nèi)酯類雜質(zhì)的引入，但99％的乙醇成本高，高濃度的乙醇亦不適合工業(yè)化生產(chǎn)，存在一定的技術(shù)缺陷。

文獻(xiàn)“土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯的提取與純化工藝”(張樂；土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯的提取與純化工藝；天然產(chǎn)物研究與開發(fā)；2015年第27卷)公開了土木香主要倍半萜內(nèi)酯的提取、純化方法，包括用95％的乙醇加熱回流提取。該法在一定程度上能高效提取出土木香中倍半萜內(nèi)酯類成分，但回流提取能耗高，且可能對(duì)穩(wěn)定性較差的倍半萜內(nèi)酯類成分造成破壞，存在一定的技術(shù)缺陷。

在萃取溶劑及純化方面，文獻(xiàn)“土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯的提取與純化工藝”(張樂；土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯的提取與純化工藝；天然產(chǎn)物研究與開發(fā)；2015年第27卷)公開了土木香主要倍半萜內(nèi)酯的提取、純化方法，并優(yōu)化了提取工藝。該方法在純化主要指標(biāo)性成分時(shí)，未對(duì)95％的土木香乙醇提取物進(jìn)行萃取及粗分離，直接上硅膠柱分離，會(huì)引入大量非倍半萜內(nèi)酯類成分，且影響硅膠的分離效能。

碩士論文“治療IBS有效部位土木香總內(nèi)酯的制備工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究”(張樂；上海交通大學(xué)，2014級(jí)碩士生)公開了土木香總內(nèi)酯的制備工藝，但其總內(nèi)酯中包含的倍半萜內(nèi)酯類成分較多，倍半萜內(nèi)酯類成分為一類“天然邁克爾反應(yīng)受體分子”，特別極性較大的該類成分易與體內(nèi)一些關(guān)鍵蛋白、酶發(fā)生不可逆結(jié)合，存在潛在毒性，存在一定技術(shù)缺陷。

在土木香倍半萜內(nèi)酯有效部位提取方法方面，冷浸法、回流提取法、超臨界流體萃取法均有應(yīng)用。冷浸法提取效率低，提取溶劑用量大；回流提取法可能會(huì)造成一些熱敏性倍半萜內(nèi)酯類成分的降解，能耗亦大；超臨界流體萃取法提取效率高，但設(shè)備昂貴，高壓下操作，亦對(duì)人員、廠房等要求高，會(huì)增加生產(chǎn)成本。

在土木香倍半萜內(nèi)酯純化工藝方面，硅膠柱層析法應(yīng)用較多。該法對(duì)土木香倍半萜內(nèi)酯的分離、純化具有一定優(yōu)勢(shì)。文獻(xiàn)報(bào)道的多是某些倍半萜內(nèi)酯單體的分離、純化方法，較少涉及土木香倍半萜內(nèi)酯有效部位。有文獻(xiàn)報(bào)道亦提到了利用硅膠柱層析純化土木香總內(nèi)酯，但該總內(nèi)酯成分復(fù)雜，藥效物質(zhì)不明確。

在土木香倍半萜酯應(yīng)用方面，文獻(xiàn)報(bào)道多集中在驅(qū)蟲、抗菌等方面。其在癌癥治療方面有報(bào)道，但以白血病為主，且較多文獻(xiàn)報(bào)道主要集中在：土木香某倍半萜內(nèi)酯單體體外對(duì)人源腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制活性，藥效物質(zhì)明確的土木香倍半萜內(nèi)酯有效部位，對(duì)較難治療的人源胰腺癌細(xì)胞的抑制活性鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)上述問題，提供一種科學(xué)合理，工藝操作簡(jiǎn)單的菊科旋覆花屬植物土木香倍半萜內(nèi)酯有效部位的制備方法。所述倍半萜內(nèi)酯有效部位藥效物質(zhì)明確，純度高，幾個(gè)土木香內(nèi)酯協(xié)同，符合中藥多組分、多靶點(diǎn)協(xié)同發(fā)揮藥效的優(yōu)勢(shì)及特點(diǎn)，其對(duì)胰腺癌的體外抑制活性亦預(yù)示其具有重要的應(yīng)用價(jià)值。