[發明專利]一種用于檢測手足口病相關病原體的LAMP引物組合物及其相關應用

有效

• 申請號: 201710305674.6
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN107058628B
• 公開（公告）日: 2020-04-21
• 發明（設計）人: 方雪恩;李楊;嚴俊;閔建峰;孔繼烈
• 申請（專利權）人: 上海速創診斷產品有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

本發明提供了一種用于檢測手足口病相關病原體的LAMP引物組合物及其相關應用，本發明提供的用于檢測手足口病相關病原體的LAMP引物組合物靈敏度高、準確性好，同時本發明將基于LAMP法的微流控芯片技術應用于手足口病相關病原體的檢測，利用微流控芯片高通量、快速、靈敏、特異性好的特點，提高手足口病相關病原體的檢測速度、通量和靈敏度，大大降低成本，縮短檢測時間。

技術領域

本發明涉及傳染性疾病診斷技術領域，尤其涉及一種用于檢測手足口病相關病原體的LAMP引物組合物及其相關應用。

背景技術

手足口病(Hand-foot-mouth Disease,HFMD)是由多種人腸道病毒引起的一種兒童常見傳染病，是我國法定報告管理的丙類傳染病。大多數患者癥狀輕微，以發熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要癥狀。少數患者可出現無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、神經源性肺水腫和心肌炎等，個別重癥患兒病情進展快，可導致死亡。

引起手足口病的病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒屬，包括柯薩奇病毒A組(CoxasckievirusA,CVA)的2、4、5、7、9、10、16型等，B組(Coxasckievirus B,CVB)的1、2、3、4、5型等；腸道病毒71型(Human Enterovirus 71,EV71)；埃可病毒(Echovirus,ECHO)等。柯薩奇病毒是從1948年Dolldorf和Sickles在美國紐約州Coxsackie鎮，從臨床診斷為脊髓灰質炎的患兒糞便中分離出來的一組病毒。該病毒的毒粒為二十面體，立體對稱，呈球形狀，裸露的核衣殼，直徑約23-30nm，無包膜，無突起，病毒有核酸和蛋白質組成。人類手足口病中以EV71、CVA16、CA10以及CA6型較為常見。人類腸病毒71型于1969年首次從加利福尼亞患有中樞神經系統疾病的嬰兒糞便標本中分離出來的，EV71為目前腸病毒群中最晚發現的病毒，其感染性強且致病率高，尤其是神經系統方面的并發癥。近年來，國內陸續發現CA6以及CA10型逐漸流行，慢慢占據主要流行株。

人類是腸病毒唯一的傳染來源，主要經由腸胃道(糞-口、水、食物污染)或呼吸道(飛沫、咳嗽或打噴嚏)傳染，也可經由接觸病人皮膚水泡的液體而受到感染。在發病前數天，喉嚨部位與糞便就可發現病毒，此時即有傳染力，通常以發病后一周內傳染力最強；而患者可持續經由腸道釋出病毒，時間長達8到12周之久。潛伏期為2到10天，平均約3到5天。腸病毒適合在濕、熱的環境下生存與傳播。截至2016年12月31日，全國已累計報告手足口病發病例數為2468174例，其中，死亡數為201例。全國的手足口病防控形勢十分嚴峻。

目前手足口病腸道病毒核酸檢測類的產品都是膠體金、酶聯免疫以及熒光PCR產品。其中以熒光PCR法居多，但是該檢測方法具有檢測靶點少，靈敏度較低，操作繁瑣，檢測耗時，檢測儀器費用昂貴等缺陷。因此，因此，在科學研究和生產實踐中均需要一種快速簡便、容易普及、安全有效且適用于現場操作的快速檢測方法。

環介導等溫基因擴增技術(Loop-Mediated Isothermal Amplification，以下簡稱LAMP法)是日本榮研化學株式會社于2000年前后開發出的基因擴增技術，其具有快速、靈敏、特異性強等優點，可以用于病原體的核酸快速檢測。微流控芯片作為一種新型核酸檢測技術具有高通量、快速、準確、可靠等特點，能夠實現對組群病原體樣品進行多目標同時檢測。如果將兩者進行結合，則極大的提高病原體核酸檢測的效率。因此，將LAMP等溫擴增與微流控芯片相結合，尚屬首次應用于手足口病相關病原體的檢測與分型。

發明內容

本發明為解決現有技術中的上述問題提出的一種用于檢測手足口病相關病原體的LAMP引物組合物及其相關應，本發明的具體技術方案包括：

首先，本發明的第一個方面提供了一種用于檢測手足口病相關病原體的LAMP引物組合物，包括腸道病毒EV通用型引物組、腸道病毒EV71型引物組、腸道病毒CA16型引物組、腸道病毒CA10型引物組、腸道病毒CA6型引物組中的任意一組或幾組；