[發明專利]尿液中游離甲氧基腎上腺素類物質的檢測方法

有效

• 申請號: 201710305185.0
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN107247093B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發明（設計）人: 張婷;李維;佘旭輝;劉偉霞;汪慧;趙蓓蓓;程雅婷;李卓陽;陳靜宜;董衡;沙小花
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭彤

本發明涉及一種尿液中游離甲氧基腎上腺素類物質的檢測方法，包括如下步驟：所述游離甲氧基腎上腺素類物質包括甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素和3?甲氧酪胺；樣品前處理：在尿液樣品中加入混合內標溶液，經過固相萃取得洗脫液，吹干，加入復溶液，得待測樣品；采用液相色譜串聯質譜儀對所述待測樣品進行檢測。上述檢測方法可以實現尿液中甲氧基腎上腺素類物質的定性和定量檢測，具有前處理簡單，有效去除了干擾物質，靈敏度高，特異性強，定性、定量功能強大，準確性好，并且整個檢測過程時間短、檢測通量高。

技術領域

本發明涉及醫學檢測技術領域，特別是涉及一種尿液中游離甲氧基腎上腺素類物質的檢測方法。

背景技術

血液和尿液中的甲氧基腎上腺素類物質以游離形式和與硫酸或葡萄糖醛酸結合的方式存在。兒茶酚胺類物質在體內調節基本生理功能，能幫助調節血流量和血壓，在機體應激狀態下扮演著重要角色。甲氧基腎上腺素類物質一方面來源于兒茶酚胺類激素，一方面直接來源于嗜鉻細胞瘤。

基于液相色譜-質譜聯用檢測的內分泌性疾病的代謝產物目前已廣泛應用于各種高端實驗室，可以更有效、更準確、快速地檢出嗜鉻細胞瘤相關激素水平。目前常用的兒茶酚胺代謝物的檢測方法主要有放射酶學法、化學發光法、熒光法和高效液相色譜法等，這些檢測方法主要存在以下一些問題：第一，樣品前處理過程復雜，并且需要起始樣品量較大；第二，現有檢測技術過程時間長，實驗誤差較大，通量低；第三，由于腎上腺素和甲氧基去甲腎上腺素分子量一樣，結構非常類似，無法用常規檢測方法區分，特異性較差。

主要問題如下：

1、24h尿液兒茶酚胺物質免疫學檢測方法成本高、易出現假陽性。

2、24h尿液中去結合性甲氧基腎上腺素類物質檢測由于部分可來自消化道而易產生假陽性。

專利CN201610935910.8高通量液相色譜串聯質譜的檢測方法以及檢測4種兒茶酚胺代謝物的方法專利中，檢測過程涉及樣品制備、衍生化反應、樣品前處理、液相色譜分離以及串聯質譜檢測等步驟，樣品前處理復雜衍生化過程過于復雜且耗時較長。

因此，本領域技術人員迫切需要一種前處理簡單、檢測快速、方法靈敏度高、特異性強的適用于尿液游離甲氧基腎上腺素類物質的檢測方法。

發明內容

基于此，本發明提供一種前處理簡單、檢測快速、方法靈敏度高、特異性強的適用于尿液游離甲氧基腎上腺素類物質的檢測方法。

具體的技術方案如下：

一種尿液中游離甲氧基腎上腺素類物質的檢測方法，包括如下步驟：

所述游離甲氧基腎上腺素類物質包括甲氧基腎上腺素、甲氧基去甲腎上腺素和3-甲氧酪胺；

樣品前處理：在尿液樣品中加入混合內標溶液，經過固相萃取得洗脫液，吹干，加入復溶液，得待測樣品；

所述混合內標溶液為含有甲氧基腎上腺素內標物、甲氧基去甲腎上腺素內標物和3-甲氧酪胺內標物的甲酸水溶液；

采用液相色譜串聯質譜儀對所述待測樣品進行檢測：

液相色譜條件為：采用反向色譜柱；流動相：A相為甲酸含量為0.1-0.3wt％的水溶液，B相為甲酸含量為0.1-0.3wt％的甲醇溶液，采用梯度洗脫；

質譜條件為：正離子模式，掃描方式為多反應監測離子掃描。

在其中一些實施例中，所述液相色譜條件為：

色譜柱：反相Agilent Pursuit PFP色譜柱；

流動相的流速為：0.2-0.5mL/min；

柱溫為28-32℃；

梯度洗脫方式為：