[發明專利]一種冬棗花藥培養再生單倍體植株體系及其培養方法

在審

• 申請號: 201710304633.5
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN106962198A
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 武曉紅;王玖瑞;劉孟軍;代麗;趙習平
• 申請（專利權）人: 河北省農林科學院石家莊果樹研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司11467
• 代理人: 劉小靜

技術領域

本發明涉及農業技術領域，具體涉及一種冬棗花藥培養再生單倍體植株體系及其培養方法。

背景技術

1953年，Tuleck用銀杏花粉在人工培養基上第一次成功地誘導形成單倍體愈傷組織Guha和Maheshwari(1964)首次成功地從毛葉曼陀羅(Datura inoxia)花藥培養中獲得單倍體植株，隨后證實是由胚狀體途徑獲得的單倍體花粉植株，從此開創了利用花粉培育單倍體的新途徑，近30年來，利用花藥培養產生單倍體植株的技術已被廣泛應用到10個科，24個屬，34個種的250多種植物上。果樹花藥培養單倍體的研究起步較晚，20世紀70年代末到80年代初先后在柑橘、蘋果、葡萄、草莓、荔枝、龍眼等樹種上取得了成功。棗(Ziziphus jujuba Mill.)是我國特色優勢果樹，關于棗的花藥培養，鮮有報道，并存在愈傷組織誘導率較低(43.1％)的問題。

中國專利公開號CN104041414B公開了一種辣椒花藥培養獲得單倍體植株的方法，包括選取花蕾，花蕾消毒，花藥接種，預處理，花藥培養，誘導愈傷組織再分化為單倍體植株；該發明采用固體培養基將小孢子和花藥壁共培養，低溫、熱激預處理，調節愈傷誘導、分化培養基成分和培養條件，提高了愈傷率和愈傷組織的分化能力；應用此方法進行辣椒花藥培養，愈傷誘導率60％以上，出苗率80％以上，解決了辣椒花藥培養誘導率低的難題。但是該發明并不適用于冬棗培養。

中國專利公開號CN1934932公開了一種離體誘導冬棗花藥愈傷組織的方法，即通過冬棗花藥的組織培養獲得其愈傷組織,愈傷組織誘導率達86.23％，包括外植體采集、消毒、初始誘導、增殖培養。在5～6月選取田間直徑為0.3～0.6cm、花萼尚未張開的冬棗未成熟花蕾，4℃冰箱預處理1～3D。流水沖洗1～2H,超凈工作臺上將花蕾放入70％乙醇30S，再轉入0.1％HGCL2溶液中8mic，無菌水沖洗3～4次后剝取花藥，啟動培養時將無菌花藥接種在MS+麥芽糖15～20g/L+TDZ0.5-1.0mg/L+NAA0-0.5mg/L的培養基上進行暗培養三周，然后轉至弱光下(800～1000LUX)培養。花藥逐漸產生黃綠色的、松散顆粒狀的愈傷組織，且隨培養時間的延長逐漸增多。增殖培養時將獲得的初始愈傷組織轉接到MS+麥芽糖15～20g/L+TDZ0.1-0.5mg/L+NAA0-0.5mg/L的培養基中進行增殖培養,愈傷組織可快速增殖。該方法可在70D左右獲得大量冬棗花藥愈傷組織；但是該方法步驟繁瑣，應用受限。

花藥培養是單倍體育種的重要途徑，不但縮短了育種年限，并且提高了育種效率。就棗樹而言，通過單倍體育種有可能使無性繁殖的棗樹也能用種子繁殖，并為基因型高度雜合的棗品種遺傳性研究提供純系材料，從而縮短育種年限并促進棗樹遺傳理論工作的研究。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種冬棗花藥培養再生單倍體植株體系及其培養方法，體系組成簡單，易于培養，通過單倍體育種使無性繁殖的棗樹也能用種子繁殖，并為基因型高度雜合的棗品種遺傳性研究提供純系材料，從而縮短育種年限并促進棗樹遺傳理論工作的研究。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種冬棗花藥培養再生單倍體植株體系，包括花藥培養基、一級愈傷組織培養基和二級愈傷組織培養基，

所述花藥培養基由1/2的MS、0.8～1.2mol/L 2，4-D、18～22g/L的麥芽糖和3.2～3.7g/L的瓊脂組成；

所述一級愈傷組織培養基由MS、0.8～1.2mg/L的TDZ、18～22g/L的麥芽糖和3.2～3.7g/L的瓊脂組成；

所述二級愈傷組織培養基由MS、1.8～2.2mg/L的三十烷醇、18～22g/L的麥芽糖和3.2～3.7g/L的瓊脂組成。

進一步地，所述花藥培養基由1/2的MS、1.0mol/L2，4-D、20g/L的麥芽糖和3.5g/L的瓊脂組成；

所述一級愈傷組織培養基由MS、1.0mg/L的TDZ、20g/L的麥芽糖和3.5g/L的瓊脂組成；

所述二級愈傷組織培養基由MS、2.0mg/L的三十烷醇、20g/L的麥芽糖和3.5g/L的瓊脂組成。

一種冬棗花藥培養再生單倍體植株體系的培養方法，采用上述的冬棗花藥培養再生單倍體植株體系進行培養。

進一步地，包括以下步驟：

S1.將冬棗花蕾浸泡在0.10mol/L的甘露醇中3天，然后接種在花藥培養基上，培養40～60天，得到愈傷組織；