[發明專利]凝結芽孢桿菌在制備預防或治療支氣管哮喘制劑中的應用

在審

• 申請號: 201710303175.3
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN107115362A
• 公開（公告）日: 2017-09-01
• 發明（設計）人: 崔云龍;趙婀姿;李洪福
• 申請（專利權）人: 青島東海藥業有限公司
• 主分類號: A61K35/742
• 分類號: A61K35/742;A61K35/745;A61P11/06;A23L33/135;A23L2/52
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及凝結芽孢桿菌在制備預防或治療支氣管哮喘制劑中的應用，具體是用凝結芽孢桿菌預防或治療支氣管哮喘，降低氣道高反應性、減輕哮喘癥狀。

背景技術

支氣管哮喘(簡稱哮喘)是世界范圍內嚴重威脅公眾健康的慢性疾病之一，是一種嚴重的呼吸道疾病。支氣管哮喘患者具有氣道高反應性，通常出現廣泛多變的可逆性氣流受限，并引起反復發作性的喘息、氣急、胸悶或咳嗽等癥狀。支氣管哮喘不但發病率高，而且病程長且發作反復，已經成為了一個嚴重的公共衛生問題。由哮喘所帶來的經濟負擔無論從直接醫療費用(住院和藥品使用)還是間接的非醫療費用(包括誤工及非正常死亡)都相當大。WHO報道，在全世界范圍計算，哮喘相關的經濟花費比結核病和艾滋病的總數還高。兒童期是哮喘發作的敏感階段，哮喘導致的患兒缺課率升高、活動受到限制、影響社交能力等，對兒童的發育和成長產生更為深遠的影響。

目前哮喘的治療常用藥物包括吸入糖皮質激素(簡稱激素)、白三烯調節劑、長效β₂-受體激動劑等。目前激素是臨床上最常用的藥物，但部分哮喘患者對激素不敏感，依從性不佳，長期或較高劑量應用會增加藥物不良反應。

本發明人經過研究發現，凝結芽孢桿菌能夠有效預防或治療支氣管哮喘，安全沒有任何毒副作用，效果優于雙歧桿菌，且未見相關研究報道，特申請此發明專利。

發明內容

本發明的目的是提供一種能預防或治療支氣管哮喘的制劑，該制劑由凝結芽孢桿菌制成。

本發明的制劑的制備優選是通過下述步驟實施的，但不局限于此制備工藝，公知的能實現的制備工藝均可以：采取可能含凝結芽孢桿菌的樣品，然后將樣品置于滅菌瓶內，研究時從中取一定量的樣品加入18mL滅菌的稀釋液中，充分混勻，在無菌操作臺內，進行10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7梯度稀釋，取10^-5、10^-6、10^-7三個稀釋梯度，分別涂布于凝結芽孢桿菌選擇性單菌落分離固體培養基上，置于培養箱，37℃下培養48小時，選擇長勢良好的單菌落分別接種于液體擴增培養基中，置于培養箱內，37℃下擴增培養48小時。將所得培養液離心(12000rpm)分離出菌體后，將菌體冷凍真空干燥，調制出干燥菌粉，然后根據《伯杰細菌鑒定手冊》、相關細菌鑒定文獻或16S rRNA序列對比分析進行凝結芽孢桿菌鑒定和毒性試驗，將無毒性的凝結芽孢桿菌干燥菌粉按需要比例添加輔料制成片劑、膠囊、散劑、粉劑或液體制劑等各種劑型，也可加入其他活菌或低聚果糖等低聚糖起到協同作用。

凝結芽孢桿菌選擇性單菌落分離固體培養基優選但不局限于：純化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物10g，檸檬酸二銨2g，乙酸鈉5g，酵母粉5g，葡萄糖5g，磷酸二氫鉀2g，吐溫801.0ml，碳酸鈣20g，硫酸鎂0.58g，硫酸錳0.25g，瓊脂15g，調pH 6.2-6.5，115℃高壓滅菌20min。

凝結芽孢桿菌液體擴增培養基優選但不局限于：純化水1000mL，蛋白胨10g，牛肉浸取物3g，氯化鈉5g，葡萄糖5g，調pH 7，115℃高壓滅菌20min。

為進一步具體說明本發明，發明人利用上述方法通過凝結芽孢桿菌選擇性單菌落分離固體培養基分離鑒定出了無毒性的凝結芽孢桿菌，本發明所述凝結芽孢桿菌并不局限于為說明本發明所述的菌，只要無毒性的凝結芽孢桿菌均是本發明所述，均在本發明的保護范圍內。

本發明所述凝結芽孢桿菌優選但不限于凝結芽孢桿菌TBC169保藏編號CGMCC1207或凝結芽孢桿菌保藏編號CGMCC1.2407。

本發明實施說明中優選使用的凝結芽孢桿菌的細菌學性質：

1、為說明本發明，本發明利用上述方法分離的凝結芽孢桿菌為凝結芽孢桿菌TBC169保藏編號CGMCC1207。

2、菌落形態

顯微鏡觀察：桿狀，革蘭氏染色陽性。

平板形態：菌落呈白色、圓形、邊緣整齊、大小2-3mm。

3、生理生化鑒定

明膠液化：－；過氧化氫酶：+；VP試驗：+；苯丙氨酸脫氨酶試驗－。

4、糖酵解實驗鑒定

葡萄糖：+；麥芽糖：+；蔗糖：+；木糖：－；果糖：+；鼠李糖：－；乳糖：+；菊粉：+；半乳糖：+；糊精：+。