[發明專利]抗菌環（甘氨酸?色氨酸?亮氨酸?D?亮氨酸?纈氨酸?天冬酰胺）肽的制備方法

在審

• 申請號: 201710302900.5
• 申請日: 2017-05-03
• 公開（公告）號: CN107098952A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 葛飛;馬琪森;陶玉貴;朱龍寶;李婉珍;宋平;江志超
• 申請（專利權）人: 安徽工程大學
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/04;C07K1/02;C07K1/06
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司11283
• 代理人: 鄒飛艷,張苗

1.一種抗菌環(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-纈氨酸-天冬酰胺)肽的制備方法，其特征在于，包括：

1)將如式(I)所示結構的基體樹脂與Fmoc-Asn(trt)-OH在溶劑中進行接觸反應以制得如式(II)所示結構的一級樹脂，接著通過甲醇封頭所述一級樹脂，然后通過Fmoc洗脫劑洗脫去除所述一級樹脂的Fmoc，最后經過哌啶脫保護以得到如式(III)所示結構的二級樹脂；

2)將所述二級樹脂依次與多種改性氨基酸進行多次改性反應得到如式(IV)所示結構的三級樹脂；每步所述改性反應為：將樹脂與所述改性氨基酸在溶劑和HATU的存在下進行接觸反應，然后經過哌啶脫保護；單次的改性反應中的改性氨基酸依次獨立為Fmoc-Val-OH、Fmoc-D-Leu-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Gly-OH；

3)將樹脂洗脫劑洗脫去除所述三級樹脂中的樹脂基團以得到如式(V)所示結構的直鏈六肽；

4)在溶劑、PyAop、HOAt和DIPEA的存在下，所述直鏈六肽進行液相環合反應以制得如式(VI)所示結構的環狀物；

5)通過基團洗脫劑洗脫去除所述環狀物上的Boc和Trt以制得如式(VII)所示結構的抗菌環(甘氨酸-色氨酸-亮氨酸-D-亮氨酸-纈氨酸-天冬酰胺)肽；

其中，X為鹵素，Fmoc為芴甲氧羰基，Boc為叔丁基氧羰基，Trt為三苯甲基。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其中，相對于2g的所述基體樹脂，所述Fmoc-Asn(trt)-OH的用量為2-3mmol，所述Fmoc-Val-OH的用量為7.5-8.5mmol，所述Fmoc-D-Leu-OH的用量為7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Leu-OH的用量為7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Trp(Boc)-OH的用量為7.5-8.5mmol，所述Fmoc-Gly-OH的用量為7.5-8.5mmol。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其中，X為Br或Cl；

優選地，所述基體樹脂為2-氯三苯甲基氯樹脂。

4.根據權利要求1-3中任意一項所述的制備方法，其中，在步驟1)中，所述接觸反應滿足以下條件：反應溫度為15-35℃，反應時間為1-2h；

優選地，所述Fmoc洗脫劑依次為N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其中，在步驟2)中，單次的改性反應滿足以下條件：反應溫度為15-35℃，反應時間為1-2h。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其中，在步驟2)中，單次的改性反應中，相對于1mmol的所述基體樹脂，所述HATU的用量為1-2mmol。

7.根據權利要求5或6所述的制備方法，其中，在步驟3)中，所述樹脂洗脫劑由三氟乙醇、乙酸與二氯甲烷組成；

優選地，所述三氟乙醇、乙酸與二氯甲烷的體積比為1：(0.8-1.2)：(7-10)；

更優選地，相對于2g的所述基體樹脂，所述樹脂洗脫劑的用量為25-35mL；

進一步優選地，在步驟3)中，所述洗脫滿足以下條件：洗脫溫度為15-35℃，洗脫時間為3-5h。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其中，在步驟4)中，相對于100mg的所述直鏈六肽，所述PyAop的用量為0.4-0.5mmol，所述HOAt的用量為0.4-0.5mmol，所述DIPEA的用量為0.8-1.0mmol；

優選地，所述液相環合反應滿足以下條件：反應溫度為0-35℃，反應時間為12-36h；

更優選地，所述液相環合反應滿足以下條件：0℃下滴加直鏈六肽到反應體系中，滴加完畢，在22-28℃的條件下反應10-15h。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其中，在步驟5)中，所述基團洗脫劑由三氟乙酸和水組成；

優選地，所述三氟乙酸和水的體積比為(13-16)：1；

更優選地，相對于100mg的所述直鏈六肽，所述基團洗脫劑的用量為8-15mL；

進一步優選地，在步驟5)中，所述洗脫滿足以下條件：洗脫溫度為15-35℃，洗脫時間為1-2h。

10.根據權利要求1-3中任意一項所述的制備方法，其中，所述哌啶脫保護滿足以下條件：哌啶溶液濃度為20-25重量％；相對于相對于2g的所述基體樹脂，所述哌啶溶液的用量為20-30mL；反應時間為20-40min，反應溫度為15-35℃。