[發明專利]一株中國彎頸霉及其在生產蟲草菌絲中的應用

在審

• 申請號: 201710302225.6
• 申請日: 2017-05-02
• 公開（公告）號: CN108795775A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 汪家春;李兆蘭;儲智勇;張陣陣
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍醫學研究所;南京大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/04;C12P19/40;A61K36/06;A61P39/00;C12R1/645
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

本發明公開了一株從天然冬蟲夏草分離的中國彎頸霉新種（Tolypocladium sinense C.L.Li sp.nov.）8560菌株，有較多方面的特性與天然冬蟲夏草相同，分子生物學rDNA ITS的基因測序序列與有些冬蟲夏草相同，中國彎頸霉產生菌絲多糖的化學結構與冬蟲夏草子實體多糖的化學結構完全相同，產生多種有效成分與生理功效的特性與冬蟲夏草相一致。中國彎頸霉菌絲生長速度快，菌絲產量高，分生孢子數量多，培養周期短，通過發酵培養以求獲得在蟲草菌絲生產中的應用。

技術領域

本發明涉及一株從天然冬蟲夏草分離的中國彎頸霉新種8560及其在生產蟲草菌絲和/或與冬蟲夏草配伍制備冬蟲夏草口服液中的應用。

背景技術

冬蟲夏草(簡稱蟲草)是我國特有的傳統滋補良藥，屬于蛇頭蟲草科Ophiocordycipitaceae，是冬蟲夏草菌Cordyceps sinensis寄生在蟲草蝙蝠蛾幼蟲上繼而形成菌核和子座組織體。天然蟲草具有抗衰老、抗病菌、抗惡性腫瘤、擴張血管、改善動脈硬化、調節內分泌等多種功效。蟲草一般生長在海拔3500～5000m的高原寒冷草甸地區，其冬蟲夏草的自然資源較少，近年來的過度采集已使其受到嚴重破壞，天然蟲草已被國家列為瀕危保護菌種。人工培育蟲草已成為合理保護、利用這一稀有珍貴藥用資源的重要技術。人工培養的蟲草菌能發揮與天然蟲草相同或相近的功效。

冬蟲夏草是一種子囊菌，在其生活史中具有分生孢子階段(無性型)和子囊孢子階段(有性型)。在人工培養、液體發酵等實際生產中使用的冬蟲夏草菌種均為無性階段，其菌種的正確鑒定至關重要，故而其無性型問題特別引人關注。已報道的冬蟲夏草的無性型菌種有22個學名，涉及13個屬，但其中部分無性型名稱與冬蟲夏草的關系有待進一步驗證，目前已有證據表明中國被毛孢(Hirsutella sinensis)與冬蟲夏草無性型的關系。

中國彎頸霉(Tolypocladium sinense)是從天然蟲草中分離出到的無性型新種，有關該新種的研究和應用，國外尚未有報道，國內有少數有關該菌株的報道主要集中在該菌培養條件的探討、化學成分的初步分析，其發酵培養物的菌絲體具有與冬蟲夏草基本相同的化學成分和藥理作用。

國外資深菌物學家Solomon P.Wasser等(2011)研究報道，2006年6月從西藏高原采集冬蟲夏草標本，共分離30只菌株，經培養和鑒定，其中有27株為中國彎頸霉(Tolypocladium sinense)，有2株為中國被毛孢(Hisutella sinensis)，研究結果表明冬蟲夏草的無性型是中國彎頸霉和中國被毛孢。顯然該研究認為中國彎頸霉是冬蟲夏草的第二個無性型。由于冬蟲夏草生活史的多型現象，寄主昆蟲種類的多樣性，不同產地生態環境的差異性，土壤微生物種群的多樣性，所以中國被毛孢不可能是冬蟲夏草的唯一無性型。中國彎頸霉從分子生物和生化方面與天然冬蟲夏草具有多方面的相似性。

發明內容

本發明提供了一株中國彎頸霉新種8560(Tolypocladium sinense C.L.Lisp.nov.)，分類命名：中國彎頸霉(Tolypocladium sinense)，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，保藏號CGMCC No.13374，保藏日期為2016年12月21日。其是從云南省迪慶藏族自治州產的冬蟲夏草菌核子座及子囊孢子分離所獲得的一株純菌種。將分離出來的中國彎頸霉進行分子生物學鑒定，分析其與冬蟲夏草之間的關系，提取基因組DNA，通過PCR擴增其18S- 28S rDNA之間的內轉錄間隔區及高度保守的5.8S rDNA序列進行測序，將所得的序列與天然冬蟲夏草的相應區域的DNA進行比對，結果表明：中國彎頸霉新種8560的 ITS序列與相關產地的冬蟲夏草序列的同源性達99％，其rDNA ITS基因序列如SEQ NO 1所示。

一.菌株8560的固體培養及形態特征