[發(fā)明專(zhuān)利]一種組織DNA快速提取試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710301910.7
• 申請(qǐng)日: 2017-05-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107099527A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉淑園;陳華云;丁渭;肖湘文;陸同山
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州和實(shí)生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種組織DNA快速提取試劑盒，本發(fā)明還涉及使用磁珠法提取組織DNA的方法。

背景技術(shù)

在現(xiàn)代疾病診斷當(dāng)中，核酸占據(jù)著非常重要的地位，其中DNA的作用更顯突出，而血液跟組織則是容易獲取的DNA重要來(lái)源。但是，組織提取與血液提取相比較而言，采集動(dòng)物組織操作簡(jiǎn)單、不需要抗凝劑，便于保存和攜帶運(yùn)輸。所以組織提取DNA更具優(yōu)勢(shì)。不過(guò)在PCR分子診斷過(guò)程中，獲得的DNA的總拷貝數(shù)和質(zhì)量會(huì)直接影響到后續(xù)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，所以，獲得有效、可靠的DNA是PCR分子診斷的關(guān)鍵。

雖然傳統(tǒng)的液氮研磨和酚氯仿提取核酸的方法能夠獲得質(zhì)量較好的核酸，但是其中用到的化學(xué)物質(zhì)卻有著不可忽視的毒性，而且整個(gè)提取過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng)，浪費(fèi)大量的時(shí)間和人力物力。進(jìn)一步來(lái)說(shuō)，現(xiàn)在普及的柱提法核酸提取試劑也能獲得質(zhì)量很好的核酸，毒性也可以忽略，但是耗費(fèi)的時(shí)間之久同樣不可忽視。

除去毒性和時(shí)間的因素以外，這兩種試劑提取核酸的操作當(dāng)中免不了各種洗滌液的添加和丟棄，這個(gè)過(guò)程極其容易導(dǎo)致樣本之間的交叉污染。當(dāng)樣本量較多的情況下，還容易出錯(cuò)，致使工作效率低下。所以，發(fā)明一種快速、高效和操作方便的DNA提取方法勢(shì)在必行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種使用便捷、安全、高效、自動(dòng)化的組織DNA快速提取試劑盒，解決目前市面上同類(lèi)產(chǎn)品提取效率低、提取耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)以及需要全程手工操作提取等問(wèn)題。

一種組織DNA快速提取試劑盒，組分包括裂解液、蛋白酶K、結(jié)合液、磁珠、洗滌液1、洗滌液2、洗脫液、組織消化液，提取操作時(shí)還需使用組織DNA提取方法以及Smart32自動(dòng)化提取程序。

優(yōu)選的，其中裂解液中含有Tris-HCl、異硫氰酸胍、氫氧化鈉、Nonidet P 40、EDTA-2Na；結(jié)合液含有Tris-HCl、乙醇；洗滌液1含有Tris-HCl、乙醇；洗滌液2中含有CaCl₂、乙醇；磁珠洗脫液中含有Tris-HCl、EDTA-2Na；組織消化液含有Tris-HCl、NaCl、SDS。

優(yōu)選的，所述裂解液中各成分分別為：Tris-HCl的濃度為5~11mmol/L，pH為3.5-4.5；異硫氰酸胍的濃度為5~10mmol/L；氫氧化鈉濃度為3~5mmol/L；NP-40的濃度為1%~5%；EDTA-2Na的濃度為2~5mmol/L。

優(yōu)選的，所述結(jié)合液中各成分分別為：Tris-HCl的濃度為2~5mmol/L，pH為5.0-6.0；乙醇的濃度為85~100%。

優(yōu)選的，所述洗滌液1中各成分分別為：NaCl的濃度為2~5mmol/L、Tris-HCl的濃度為2~5mmol/L，pH為5.0-6.0；無(wú)水乙醇的濃度為25%~45%。

優(yōu)選的，所述洗滌液2中各成分分別為： CaCl₂的濃度為2~5mmol/L；無(wú)水乙醇的濃度為60%~85%。

優(yōu)選的，所述洗脫液中各成分分別為：Tris-HCl的濃度為10~30 mmol/L，pH為8.0-8.5；EDTA-2Na的濃度為1~3mmol/L。

優(yōu)選的，所述組織消化液中各成分分別為：Tris-HCl的濃度為1~3mmol/L，pH為4.0-5.0；NaCl的濃度為5~10mmol/L、SDS的濃度為20~40mmol/L。

優(yōu)選的，所述試劑盒采用96孔預(yù)分裝深孔板模式，第1列和第7列預(yù)分裝的是裂解液；第2列和第8列預(yù)分裝的是洗滌液1；第3、4列和第9、10列預(yù)分裝的是洗滌液2；第5列和第11列預(yù)分裝的是磁珠；第6列和第12列預(yù)分裝的是洗脫液。

優(yōu)選的，所述試劑盒采用熱封膜工藝進(jìn)行封裝，可有效防止96深孔板中的提取試劑漏液。

優(yōu)選的，試劑盒可配合市面上的的核酸自動(dòng)提取儀smart32使用，smart32自動(dòng)化提取程序如下表：

本發(fā)明的有益效果在于：

（1）提高提取效率

與傳統(tǒng)柱提法試劑相比，（QIAamp DNA Mini Kit）本試劑盒中含有的裂解液，能夠強(qiáng)力快速裂解樣本釋放大量的DNA，結(jié)合液能夠快速為磁珠結(jié)合核酸提供穩(wěn)定的環(huán)境，大大地增強(qiáng)了提取效率。

（2）縮短提取時(shí)間