[發明專利]一種α螺旋抗菌肽RL及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710300205.5
• 申請日: 2017-05-02
• 公開（公告）號: CN107266533B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 單安山;邵長軒
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/04;C07K1/20;A61K38/10;A61P31/04
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司 23101
• 代理人: 吳振剛

本發明提供一種α螺旋抗菌肽RL及其制備方法和應用。抗菌肽RL的序列如SEQ ID No.1所示。制備方法是：以非完美兩親性α螺旋多肽折疊原則為基礎，設計出含轉角單元的非完美兩親性α螺旋肽模板WXKYWXZZYKXWYK?NH₂，X為正電荷氨基酸，Y為疏水性氨基酸，ZZ為轉角單元，當X＝R，Y＝L，ZZ＝^DPG時，抗菌肽命名為RL。通過本制備方法技術簡單，對得到的抗菌肽進行抗菌和溶血活性檢測，發現RL不但對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌，枯草芽孢桿菌七種菌種有高效的抑制作用，而且具有很低的溶血活性。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種α螺旋抗菌肽RL及其制備方法和應用。

背景技術

目前，抗生素的過分使用，導致病原微生物產生耐藥性，甚至造成畜禽產品中的藥物殘留，嚴重影響畜禽的健康狀況、產品質量以及其安全性，從而威脅到人類的健康。抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)，又稱抗微生物肽或肽抗生素，是由生物體特定基因編碼產生的一類能夠抵御外界微生物侵害、清除體內突變細胞的小分子多肽，生物體天然免疫防御系統的重要組成部分。抗菌肽的生物學特性主要有三點：一、廣譜抗菌性。多數抗菌肽可以殺滅包括革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌在內的多種細菌。二、抗菌肽的作用不涉及特定的受體。傳統的抗生素主要是與細菌胞膜或胞內特異的受體結合，受體類型有限，細菌容易通過變異而產生耐藥性，而抗菌肽的殺菌機制是通過正負電荷吸引與微生物細胞膜直接作用，改變其通透性，導致細胞內容物外滲，僅僅是陰陽離子的物理作用，所以不易產生耐藥性。三、抗菌肽具有高度的水溶性、熱穩定性、鹽離子穩定性。

然而，由于天然抗菌肽分子量小，在機體內含量甚微，分離提純困難，故天然產量非常有限。并且天然抗菌肽(例如蜂毒素和天蠶素)的治療指數不高，對機體細胞毒性較大。利用傳統方法提取天然抗菌肽面臨抗菌效果不佳或細胞毒性過大等問題，需要采取全新的方法來解決。越來越多的臨床報道，外來同源性天然抗菌肽或天然抗菌肽衍生物的大量使用會危害機體自身免疫系統，從而引起嚴重的公共健康問題。所以利用生物工程手段全新設計具有高效抗菌活性，細胞選擇性和免疫活性的的抗菌肽成為一條有效途徑，在豐富抗菌肽家族的同時，也為新型抗菌肽制劑研制和開發開辟新道路。

發明內容

基于以上不足之處，本發明提供一種α螺旋抗菌肽RL及其制備方法和應用，該抗菌肽對革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌具有高效的抑制作用，而且具有很低的溶血活性。

本發明所采用的技術如下：一種α螺旋抗菌肽RL，序列如SEQ ID No.1所示。

本發明還具有如下技術特征：

1、一種α螺旋抗菌肽RL的制備方法如下：

(1)以非完美兩親性α螺旋多肽折疊原則為基礎，設計出含轉角單元的非完美兩親性α螺旋肽模板Ac-WXKYWXZZYKXWYK-NH₂，X為正電荷氨基酸，Y為疏水性氨基酸，ZZ為轉角單元，當X＝R，Y＝L，ZZ＝^DPG時，抗菌肽命名為RL，序列如SEQ No.1所示；

(2)將抗菌肽RL采用固相化學合成法通過多肽合成儀得到肽樹脂，將得到的肽樹脂經過TFA切割后，得到多肽；

(3)經過反相高效液相色譜純化和質譜鑒定后，完成多肽的制備。

2、如上所述的一種α螺旋抗菌肽RL，在制備治療革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌感染性疾病藥物中的應用。

通過本制備方法技術簡單，對得到的抗菌肽進行抗菌和溶血活性檢測，發現RL不但對大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌，枯草芽孢桿菌七種菌種有高效的抑制作用，而且具有很低的溶血活性。綜上所述，RL是一種具有較高應用價值的抗菌肽。

附圖說明