[發(fā)明專(zhuān)利]一種夾心式免疫傳感器的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710299369.0
• 申請(qǐng)日: 2017-05-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107219282B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳厚;王靜;柏良久
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 魯東大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/327
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/327
• 代理公司: 北京志霖恒遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11435
• 代理人: 劉敏

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于無(wú)規(guī)共聚物與氧化石墨烯復(fù)合用于構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征是將丙烯酸和甲基丙烯酸酯類(lèi)單體，通過(guò)加入鏈轉(zhuǎn)移劑形成分子量可控的含有大量功能基團(tuán)的無(wú)規(guī)共聚物，連接信號(hào)分子后制備成用于信號(hào)放大的探針，將其負(fù)載到石墨烯等載體上形成復(fù)合物，借助本發(fā)明所構(gòu)建的電化學(xué)免疫傳感器成功實(shí)現(xiàn)了癌胚抗原檢測(cè)信號(hào)的指數(shù)級(jí)放大，最低檢測(cè)限為0.17皮克/毫升。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，具體是一種基于無(wú)規(guī)共聚物與氧化石墨烯復(fù)合用于構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，屬于新型納米功能材料和電化學(xué)免疫傳感器技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

多年來(lái)，癌癥一直是威脅人類(lèi)身體健康及生命安全的重大疾病，隨著工業(yè)化的不斷發(fā)展，世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)21世紀(jì)惡性腫瘤將成為人類(lèi)的“第一殺手”，故癌癥控制已經(jīng)成為全球性的醫(yī)療衛(wèi)生戰(zhàn)略重點(diǎn)。雖然惡性腫瘤的治療技術(shù)在不斷的進(jìn)步，但迄今為止，早期發(fā)現(xiàn)，診斷和治療仍然是攻克癌癥最有效的手段。在現(xiàn)階段傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)手段，如酶聯(lián)免疫法、熒光免疫法等都存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、靈敏度低、光污染等危害，由于抗體和抗原之間的高選擇性，電化學(xué)免疫傳感器在腫瘤標(biāo)志物的早期檢測(cè)中作為一種有效的分析方法被廣泛使用。

無(wú)規(guī)共聚是一種操作簡(jiǎn)單，效率高的合成大分子鏈聚合物的方法，通過(guò)加入鏈轉(zhuǎn)移劑形成分子量可控的含有大量功能基團(tuán)的無(wú)規(guī)共聚物，并在其功能基團(tuán)上加載大量的電化學(xué)標(biāo)記蒽醌二羧酸，制備成用于信號(hào)放大的探針，而后將其負(fù)載到石墨烯等載體上形成復(fù)合物，將使信號(hào)輸出呈現(xiàn)出指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。

通過(guò)此種方法簡(jiǎn)單快捷的制備的復(fù)合物用于構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器并應(yīng)用于對(duì)腫瘤標(biāo)志物的超靈敏度檢測(cè)中，并將其與其診斷方法相結(jié)合，無(wú)疑會(huì)大大提高腫瘤早期診斷率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供構(gòu)建電化學(xué)免疫傳感器的方法。

本發(fā)明提供了一種夾心式免疫傳感器的制備方法，所用單體為甲基丙烯酸酯類(lèi)和丙烯酸，采用偶氮類(lèi)引發(fā)劑或過(guò)硫酸鹽類(lèi)引發(fā)劑，所用鏈轉(zhuǎn)移劑為二硫代萘甲酸異丁腈酯,將上述單體、引發(fā)劑和鏈轉(zhuǎn)移劑通過(guò)溶液聚合的方式獲得無(wú)規(guī)共聚物后，在其功能基團(tuán)上加載大量的電化學(xué)標(biāo)記蒽醌二羧酸，制備成用于信號(hào)放大的探針，而后將其負(fù)載到石墨烯載體上形成復(fù)合物；

其中甲基丙烯酸酯類(lèi)和丙烯酸的摩爾比為100:1～1:1，甲基丙烯酸酯類(lèi)與鏈轉(zhuǎn)移劑的摩爾比為300:1；

將復(fù)合物應(yīng)用于夾心式免疫傳感器的構(gòu)建，使所組建的夾心式免疫傳感器對(duì)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)實(shí)現(xiàn)信號(hào)值的指數(shù)級(jí)放大，最低檢測(cè)限為0.17皮克/毫升。

本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的無(wú)規(guī)共聚物與氧化石墨烯復(fù)合后獲得復(fù)合物上可負(fù)載有大量的化學(xué)標(biāo)記蒽醌二羧酸，所得復(fù)合物應(yīng)用于電化學(xué)免疫傳感的構(gòu)建，可使所組建的夾心式免疫傳感器成功對(duì)腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)實(shí)現(xiàn)了信號(hào)值的指數(shù)級(jí)放大，其最低檢測(cè)限可達(dá)到0.17皮克/毫升。

具體實(shí)施方式：

下面詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明并給出幾個(gè)實(shí)施例：

實(shí)施例一：

將2.0毫升甲基丙烯酸羥乙酯、1.13毫升丙烯酸、0.0143克二硫代萘甲酸異丁腈酯、0.0154克偶氮二異氰基戊酸加入到裝有2.0毫升N,N-二甲基甲酰胺的安瓿瓶中，進(jìn)行液下通氮?dú)馓幚?～10分鐘，將安瓿瓶口火焰密封后，置于60攝氏度條件下反應(yīng)2小時(shí)，產(chǎn)物達(dá)到粘稠的狀態(tài)，取出后用1毫升N,N-二甲基甲酰胺充分溶解后，產(chǎn)物經(jīng)冷卻，透析，冷凍干燥后得到最終無(wú)規(guī)共聚物。所得到的聚合物首先負(fù)載上大量的化學(xué)標(biāo)記蒽醌二羧酸，而后與氧化石墨烯構(gòu)筑的復(fù)合物應(yīng)用于腫瘤標(biāo)志物的超靈敏度檢測(cè)，其最低檢測(cè)限為0.17皮克/毫升。

實(shí)施例二：