[發明專利]一種通過發酵制備樺褐孔菌黑色素的方法

在審

• 申請號: 201710297413.4
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN107058395A
• 公開（公告）日: 2017-08-18
• 發明（設計）人: 傅俊生;戚夢;李佳歡;胡開輝;林文雄
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12P1/02
• 分類號: C12P1/02;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體是一種通過發酵制備樺褐孔菌黑色素的方法。

背景技術

樺褐孔菌屬于真菌門，擔子菌亞門，層菌綱，非褐菌目，銹革孔菌科，褐臥孔菌屬，樺褐孔菌中含有多糖、樺褐孔素、類固醇、黑色素等物質。黑色素是樺褐孔菌中的一種重要的活性物質，黑色素是目前應用最多最廣的生物天然色素之一，是一類由酚和（或）吲哚化合物聚合氧化而成的高分子聚合物，其廣泛存在于動物、植物中，從烏賊、核桃皮等中提得的黑色素均被報道具有較強的抗氧化、清除自由基等功效且具有延緩衰老、烏發潤膚、舒氣止脹、清熱解毒、壯陽補腎、軟化血管、下淤血、消浮腫、抗肥胖、制風熱、添精神等功效，還可防治各種中老年疾病，如高血壓、心臟病、糖尿病、腎炎、血管硬化、癌癥及肝臟疾病等。傳統的黑色素合成主要釆用酶法和化學法，但是由于原料以及酪氨酸酶價格昂貴，合成流程復雜，成本較高，不利于大規模工廠化生產。如今已有許多學者利用細菌、霉菌或者真菌生產黑色素，考慮到菌種安全性，大多數菌株（如：大腸桿菌、蘇云金芽孢桿菌等）生產的黑色素難以在食品加工中使用，樺褐孔菌作為一種珍稀藥用真菌，在適宜的營養和培養條件下，樺褐孔菌的菌絲可通過液體發酵產生大量的黑色素，但鮮見對樺褐孔菌黑色素提取的研究。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種通過發酵制備樺褐孔菌黑色素的方法，以降低黑色素提取成本，同時其發酵所用的原料為銀耳菌糠汁，同時解決銀耳菌糠的資源循環利用問題。

本發明采用的技術方案是：

一種通過發酵制備樺褐孔菌黑色素的的方法，將樺褐孔菌發酵液除去菌絲體后，用強酸破壞發酵液中的蛋白質，再將黑色素通過堿性溶液沉淀出來，收集沉淀得到黑色素粗提物，再進行純化。

所述樺褐孔菌發酵液是將菌種在28℃培養5~8天后接入液體培養基中，于30℃培養15天；液體培養基中含銀耳菌糠40-50wt.%、磷酸二氫鉀0.1-0.2 wt.%、MgSO₄ 0.1-0.2 wt.%、Vb₁ 0.01~0.015 wt.%、酪氨酸0.1-0.2 wt.%，其余為水。

除去發酵液中菌絲體，取發酵液10毫升加入250ml、4mol/L鹽酸中。在60~70攝氏度水浴1.5小時后6000r/min離心15分鐘，留沉淀，使發酵液中的蛋白脂質等生物大分子被除去。

向上述所得沉淀中加入250ml、2mol/L NaOH 超聲提取2小時后再通過6000r/min離心15分鐘，棄沉淀留上清。用5mol/L鹽酸調節上清液pH至1.5~2.0。將上清液放入70℃水浴鍋中14小時。之后再通過6000r/min離心15分鐘，棄上清。最后將沉淀用粗離子水洗滌3~5次。得到純的黑色素。

本發明的優點在于：通過從樺褐孔菌發酵液中提取黑色素方法，提高樺褐孔菌深層發酵經濟效益，實現其綜合利用。且從所提取得黑色素可能與樺褐孔菌抗胃癌、心臟病等一些疾病有關。采用才用發酵法制備黑色素，可提高黑色素產量，縮短黑色素提取時間成本較低，適用于大規模工廠化生產，并可促進樺褐孔菌生理學以及人工栽培的研究。

傳統的黑色素合成主要釆用酶法和化學法，但是由于原料以及酪氨酸酶價格昂貴，合成流程復雜，成本較高，不利于大規模工廠化生產。本發明所采用的培養基配方簡單,原料來源廣,價格低廉,循環利用,適合推廣及應用。

附圖說明

圖1 樺褐孔菌黑色素紅外光譜圖。

具體實施方式

實施例1

所述的樺褐孔菌發酵液是將菌種在28℃培養7天后接入含有銀耳菌糠45wt.%、磷酸二氫鉀0.1 wt.%、MgSO₄ 0.2 wt.%、Vb₁ 0.015 wt.%、酪氨酸0.2 wt.%組成的液體培養基中，于30℃培養15天。

除去發酵液中菌絲體，取發酵液10毫升加入250ml、4mol/L鹽酸中。在65攝氏度水浴1.5小時后6000r/min離心15分鐘，留沉淀，使發酵液中的蛋白脂質等生物大分子被除去。

向上述所得沉淀中加入250ml、2mol/L NaOH 超聲提取2小時后再通過6000r/min離心15分鐘，棄沉淀留上清。用5mol/L鹽酸調節上清液pH至2.0。將上清液放入70℃水浴鍋中14小時。之后再通過6000r/min離心15分鐘，棄上清。最后將沉淀用粗離子水洗滌4次。得到較純的黑色素，得率為4.0%。

實施例2