[發明專利]鴨抗原轉運相關蛋白TAP2單克隆抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710296279.6
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN107254448B
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 韓凌霞;張圓圓;趙麗麗;陳洪巖
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/577;G01N33/68
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍;張瑞雪

本發明公開了鴨抗原轉運相關蛋白TAP2單克隆抗體及其制備方法和應用。本發明首先提供了一株穩定分泌鴨抗原轉運相關蛋白TAP2單克隆抗體的雜交瘤細胞株；本發明進一步提供了構建所述雜交瘤細胞株的方法，包括：構建表達TAP2的原核表達質粒；誘導原核表達質粒表達TAP2蛋白，將表達產物過鎳柱，用咪唑洗脫液洗脫目的蛋白得到純化的重組TAP2蛋白；用純化的重組TAP2蛋白免疫BALB/c雌小鼠，將免疫脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合，篩選獲得特異性抗體分泌最高的陽性單克隆株。免疫組織化學檢測結果表明，本發明制備的TAP2單克隆抗體(1A6)具有特異性生物學功能，能應用于檢測動物組織或細胞內的TAP2蛋白。

技術領域

本發明涉及鴨抗原轉運相關蛋白TAP2單克隆抗體以及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株，本發明進一步涉及它們在免疫組化中的應用，屬于 TAP2單克隆抗體領域。

背景技術

抗原處理相關轉運體(Transporter associated with antigen processing,TAP)是一種異二聚體跨膜轉運蛋白，TAP1/TAP2跨越內質網膜6次形成“匙孔”樣結構。腫瘤抗原和病毒編碼蛋白等內源性抗原，被抗原遞呈細胞(APC)內的蛋白酶復合物水解成8-10個氨基酸的短肽。肽首先與“匙孔”的胞漿區結合，ATP結合在TAP1/TAP2的羧基端，水解導致異二聚體構型改變，開放跨膜通道，暴露膜內區的結合位點，肽段被轉運于內質網腔內。在Tapasin、鈣連蛋白和鈣網蛋白等分子伴侶的協同作用下與內質網中新合成組裝完整的MHCIα/β2m分子上的肽結合槽結合，形成穩定的MHC I-抗原肽復合物。分泌至APC細胞表面，被CD8+T細胞識別并引起免疫應答。TAP蛋白對MHC I類分子在細胞膜上表達的密度和穩定性起重要作用：TAP分子缺陷或表達降低，可導致MHC I類分子因沒有荷載抗原肽而無法在細胞表面穩定表達。

不同種屬動物的TAP基因均位于MHC核心區域，但大小和基因組位置各不相同。火雞的TAP基因還沒有明確鑒定，但是已通過序列分析獲得了功能和序列類似的MDR/TAP基因。雞TAP2基因與優勢表達的MHC 經典I類分子a鏈編碼基因BF2緊密相連。鵪鶉TAP基因結構更為復雜，與經典I類分子4個拷貝基因相鄰。鴨有TAP1和TAP2兩個反向轉錄的拷貝基因，其中TAP2與MHCI類分子5個拷貝基因中的優勢表達基因UAA毗鄰。

在機體被致病性病毒侵襲或有應激的情況下，如果TAP基因組序列發生突變或其調節機制出現缺陷，均可以導致TAP蛋白的活性下降和表達下調，導致腫瘤抗原不能被有效地轉運，使腫瘤逃逸免疫監視，最終引起病毒性感染或發生腫瘤。

TAP基因的多態性與多種疫病的種族敏感性有關，相關度較高的有鼻咽癌(黃種人較白種人患病多)、原發性黑色素瘤、乳腺癌、漢族食管癌以及人乳頭瘤病毒導致的宮頸癌等，但免疫遺傳學分子機制尚未闡明。鴨的人工馴化時間較短，家鴨的遺傳資源豐富度遠大于家雞，是良好的免疫遺傳研究的模式動物。利用TAP基因純合的無特定病原體實驗動物化鴨群感染鴨瘟或禽流感后，不同單倍型鴨的血清抗體效價或致病性不同，表明鴨TAP基因有可能作為病毒病免疫遺傳機制研究的候選靶基因。

發明內容

本發明所要解決的第一個技術問題是提供一株穩定分泌鴨抗原轉運相關蛋白TAP2單克隆抗體的雜交瘤細胞株；

本發明所要解決的第二個技術問題是將所述雜交瘤細胞株分泌的鴨抗原轉運相關蛋白TAP2單克隆抗體應用于檢測在動物組織或細胞內表達的TAP2蛋白。

為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：