[發明專利]一種制備L-丙氨酸的方法

有效

• 申請號: 201710294839.4
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN107058414B
• 公開（公告）日: 2020-05-12
• 發明（設計）人: 黃建坡;劉煥書;孟成;張培紅;徐龍;苗位云;郭治遠
• 申請（專利權）人: 淮北新旗氨基酸有限公司
• 主分類號: C12P13/06
• 分類號: C12P13/06;C12N1/20;C12R1/225
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種制備L-丙氨酸的方法，其特征在于，在利用葡萄糖濃度為120-125g/L的葡萄糖培養基對德氏乳桿菌突變菌株Lds.0108進行培養的過程中，向所述葡萄糖培養基中接種6%的種子液，進行發酵，當發酵液中殘糖含量為38.7-45g/L時，向發酵液中補加與接種時的種子液相同的新鮮種子液，所述新鮮種子液OD值為5.36-8.0，補加的新鮮種子液的體積占補加后發酵液總體積的2.5%-3.0%繼續培養至發酵結束；

所述德氏乳桿菌突變菌株Lds.0108菌種為：Lds.0108，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號：CCTCC NO：M2013361。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，每升所述葡萄糖培養基中，包括葡萄糖120-125g，Na₂HPO₄·12H₂O 20g，KH₂PO₄ 2.0g，NaCl 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，微量無機鹽溶液10ml，余量為純化水；

所述微量無機鹽溶液中：FeCl₃·6H₂O 2.5g/L，CoCl₂·6H₂O 0.2g/L，CuCl₂·2H₂O0.1g/L，ZnCl₂ 0.2g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.3g/L，H₃BO₃ 0.1g/L，MnCl₂·4H₂O 0.5g/L，純化水余量。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述培養條件為：溫度：30℃；通風量：0m³/h，壓力：0.04MPa-0.06MPa； pH：6.5-7.0。

4.根據權利要求1~3任一項所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）制備德氏乳桿菌突變菌株Lds.0108種子液；

2）向所述葡萄糖培養基中接種體積分數為6%的所述種子液進行發酵培養；

3）當發酵液中葡萄糖的濃度為38.7-45g/Lg/L時，向發酵液中補加與種子液濃度相同的新鮮種子液，繼續培養至發酵結束。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述種子液的制備包括如下步驟：

1）在無菌條件下，將菌種接種到LB斜面培養基上，在30℃條件下恒溫培養18h；

2）在無菌條件下，用無菌生理鹽水將斜面上的菌體洗下，制成菌懸液；

3）將所述菌懸液接種到滅菌后的液體LB培養基中，發酵條件為：溫度：30℃；空氣流量：2L/min，罐壓0.04-0.06MPa；培養至OD值為5.24-8.0。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

A、制備德氏乳桿菌突變菌株Lds.0108種子液；

1）在無菌條件下，將菌種接種到LB斜面培養基上，在30℃條件下恒溫培養18h；

2）在無菌條件下，用無菌生理鹽水將斜面上的菌體洗下，制成菌懸液；

3）將菌懸液接種到滅菌后的液體LB培養基中，發酵條件為：溫度：30℃；空氣流量：2L/min，罐壓0.04-0.06MPa；培養至OD值為5.24-8.0；

B、德氏乳桿菌突變菌株Lds.0108的培養

向葡萄糖培養基中接種6%的所述種子液，在溫度：30℃；通風量：0m³/h，壓力：0.04MPa-0.06MPa；液氨控制pH：6.5-7.0的條件下進行發酵；

所述新鮮培養基的組成為每升所述葡萄糖培養基中，包括葡萄糖120-125g，Na₂HPO₄·12H₂O 20g，KH₂PO₄ 2.0g，NaCl 0.5g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，微量無機鹽溶液10ml，余量為純化水；

所述微量無機鹽溶液中：FeCl₃·6H₂O 2.5g/L，CoCl₂·6H₂O 0.2g/L，CuCl₂·2H₂O0.1g/L，ZnCl₂ 0.2g/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.3g/L，H₃BO₃ 0.1g/L，MnCl₂·4H₂O 0.5g/L，純化水余量；

C、補充新鮮種子液

當發酵液中葡萄糖的濃度為38.7-45g/L時，向發酵液中補加與種子液濃度相同的新鮮種子液，至補加的新鮮種子液的體積占補加后發酵液總體積的2.5%-3.0%，繼續培養至發酵結束。