[發明專利]一種監控熒光定量PCR反應污染的方法在審
| 申請號： | 201710292969.4 | 申請日： | 2017-04-28 |
| 公開（公告）號： | CN106868202A | 公開（公告）日： | 2017-06-20 |
| 發明（設計）人： | 辛忠濤;郭義昆 | 申請（專利權）人： | 北京海斯凱生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 中國商標專利事務所有限公司11234 | 代理人： | 桑麗茹 |
| 地址： | 100176 北京市大興區北京經*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 監控 熒光 定量 pcr 反應 污染 方法 | ||
1.一種監控熒光定量PCR反應污染的方法，其包括下列步驟：
a.制備陽性對照質粒，該陽性對照質粒上包含待檢目的基因和外參基因，該待檢目的基因和外參基因不同源或同源性低至兩者的相應引物不會錯配；
b.制備PCR反應混合物，其包含：目的基因的引物和熒光探針；內參基因的引物和熒光探針；外參基因的引物和熒光探針；所述各個熒光探針具有不同的熒光基團；
c.在待檢樣品管的PCR反應混合物中加入待檢樣品DNA模板，在陽性對照管的PCR反應混合物中加入陽性對照質粒DNA模板，進行PCR擴增；
d.所有檢測管中擴增的目的基因應全部為陽性，否則確定擴增失?。?/p>
e.待檢樣品管中擴增的內參基因應全部為陽性，否則確定擴增失??；
f.待檢樣品管中擴增的外參基因應全部為陰性，否則確定待檢樣品被陽性對照質粒氣溶膠污染；
g.陽性對照管中擴增的內參基因應全部為陰性，否則確定被PCR產物氣溶膠污染；
h.陽性對照管中擴增的外參基因應全部為陽性，否則確定擴增失敗。
2.根據權利要求1所述的方法，其還包括步驟i.在陰性對照管中加入PCR反應混合物和無菌純凈水，陰性對照管中擴增的全部基因應全部為陰性，如果陰性對照管中出現外參基因陽性信號，確定為陽性對照質粒氣溶膠污染；在外參基因是陰性條件下其它通道出現陽性信號，則確定為PCR產物氣溶膠污染。
3.根據權利要求1所述的方法，該待檢目的基因是人源的，該外參基因是植物或其它與人種屬同源性較低來源的。
4.根據權利要求3所述的方法，該外參基因是玉米16S RNA基因。
5.根據權利要求1所述的方法，該待檢目的基因是同一SNP位點的不同基因型。
6.根據權利要求5所述的應用，該待檢目的基因是人線粒體乙醛脫氫酶ALDH2基因。
7.一種陽性對照質粒在監控熒光定量PCR反應污染中的應用，該陽性對照質粒包含待檢目的基因和外參基因，該待檢目的基因和外參基因不同源或同源性低至兩者的相應引物不會錯配。
8.根據權利要求7所述的應用，該待檢目的基因是人源的，該外參基因是植物來源或其它與人種屬同源性較低的。
9.根據權利要求8所述的應用，該外參基因是玉米16S RNA基因。
10.根據權利要求7所述的應用，該待檢目的基因是同一SNP位點的不同基因型的。
11.根據權利要求10所述的應用，該待檢目的基因是人線粒體乙醛脫氫酶ALDH2基因。
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