[發明專利]一種降低蛋白質含量的玻璃酸鈉的二次解離制備方法

有效

• 申請號: 201710291328.7
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN106883320B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 何文匯;王瓊
• 申請（專利權）人: 上海景峰制藥有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種降低蛋白質含量的玻璃酸鈉的二次解離制備方法，所述方法包括以下步驟：向雞冠酶解液中加入CTAC進行沉淀絡合反應至完全沉淀，得到沉淀物；向沉淀物中加入洗滌劑進行洗滌，得到洗滌后沉淀物；向洗滌后沉淀物中加入解離液氯化鈉溶液進行解離，攪拌至無顆粒物，得到解離后藥液；向解離后藥液中加入稀釋劑進行稀釋至沉淀完全，得到玻璃酸鈉沉淀物；向玻璃酸鈉沉淀物中加入洗滌劑進行洗滌，得到洗滌后的玻璃酸鈉沉淀物；向洗滌后的玻璃酸鈉沉淀物中加入解離液進行解離，攪拌至溶液中無顆粒物，經過后處理得到玻璃酸鈉。本發明減少了多次絡合過程中的工藝時間，節約了成本；同進進一步降低的玻璃酸鈉中的蛋白質及核酸含量。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種降低蛋白質含量的玻璃酸鈉的二次解離制備方法，尤其涉及一種生物提取法制備蛋白質含量較低的玻璃酸鈉的二次解離方法。

背景技術

玻璃酸(Hyaluronic Acid，簡稱HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖胺雙糖單位反復交替而形成的一種均聚物，其重均分子量一般為10萬～1000萬Da；玻璃酸鈉(SodiumHyaluronate)為玻璃酸的鈉鹽形式，不同分子量的玻璃酸鈉具有不同的生物活性。

玻璃酸的結構非常規則，相同的雙糖單位為HA的基本結構單元，不同動物組織和細菌來源的HA無種屬差異，對人類及動物無抗原性。

玻璃酸鈉的蛋白質和核酸等雜質是導致其致炎癥性的主要原因。因此，如何制備純度較高的玻璃酸鈉是研究重點，尤其是在生物分離純化技術領域，尋求生物物質的分離純化的新技術新方法，減少雜質含量成為業界關注的重點。

傳統的玻璃酸鈉生物提取工藝生產出的玻璃酸鈉的蛋白質含量一般在0.40wt％～0.80wt％之間，為了降低蛋白質工藝，一般采用多次絡合解離的方法。但是，此工藝中玻璃酸鈉的復溶液稀釋沉淀的工藝時間太長，造成大量工藝時間和能耗的浪費；同時，其蛋白質的降低量仍有一定的區間。

CN 102516408 A公開了一種玻璃酸鈉的純化方法，該方法首先將雞冠酶解液經活性炭一次吸附過濾后，所得濾液與CPC水溶液攪拌混勻，絡合沉淀完全后，將沉淀靜置，棄去上清液，用解離液將絡合沉淀攪拌解離；解離后的液體通過稀釋至其體積的2～8倍，進行二次絡合沉淀，絡合沉淀完畢后棄去上清液，將沉淀洗滌1～3次后，用解離液將絡合沉淀攪拌解離；第二次解離后的液體用活性炭吸附后除碳過濾，濾液用醇沉淀出來的玻璃酸鈉，脫水，抽真空。

CN 104610466 A公開了一種生物提取法制備玻璃酸鈉中降低蛋白質含量的方法，所述方法是在CPC沉淀解離后，向解離液中加入純化水，稀釋解離液離子強度，通過季銨鹽絡合沉淀解離的原理：在低鹽濃度下季銨基上陽離子游離出來，與黏多糖分子上的陰離子結合形成季銨絡合物，在高鹽濃度下絡合物逐漸解離。通過這一可逆反應，從而使解離液中的沉淀重新絡合，再經漂洗、二次解離、過濾、醇沉、干燥。

然而上述現有技術中復溶液稀釋沉淀的工藝時間太長，且玻璃酸鈉中蛋白質含量仍然較高，并且玻璃酸鈉的收率較低，僅可達到千分之幾的水平。

發明內容

針對現有技術中復溶液稀釋沉淀的工藝時間太長，且玻璃酸鈉中蛋白質含量仍然較高，本發明提供了一種降低蛋白質含量的玻璃酸鈉的二次解離制備方法。本發明通過選取合適的絡合沉淀劑、合適的洗滌次數以及解離液的稀釋倍數，減少了多次絡合過程中的工藝時間，節約了成本；同進進一步降低的玻璃酸鈉中的蛋白質及核酸含量。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供了一種降低蛋白質含量的玻璃酸鈉的制備方法，所述方法包括以下步驟：

(1)向雞冠酶解液中加入十六烷基三甲基氯化銨進行沉淀絡合反應至生成的玻璃酸鈉完全沉淀，得到沉淀物；

(2)向步驟(1)得到的沉淀物中加入洗滌劑進行洗滌，得到洗滌后沉淀物；