[發明專利]一種基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法

在審

• 申請號: 201710290958.2
• 申請日: 2017-04-28
• 公開（公告）號: CN107164567A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 伊日布斯;吳銘杰;嚴金平
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12Q3/00
• 分類號: C12Q3/00;C12P7/06;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）劃線培養：在溫度為50~60℃條件下，將低溫保存的嗜熱嚴格厭氧革蘭氏陽性菌Thermoanaerobacterium sp. Rx1置于固體培養基上進行厭氧培養48~60h得到Rx1單菌落，其中液體培養基為MM641培養基，固體培養基的pH值為6.0~8.0；

（2）純化培養：將步驟（1）所得Rx1單菌落接種至液體培養基中，在溫度為50~60℃條件下進行厭氧培養12~16h得到純化Rx1菌種，其中液體培養基為MM641培養基，液體培養基的pH值為6.0~8.0；

（3）傳代培養：將步驟（2）所得純化Rx1菌種接種至液體培養基中，在溫度為50~60℃條件下進行厭氧培養至菌體生長至對數期后期得到活化Rx1菌種，其中液體培養基為MM641培養基；

（4）乙醇發酵：將步驟（3）所得活化Rx1菌種接種至發酵液體培養基中，在溫度為50~60℃、通入氮氣或二氧化碳、pH值為6.00~8.00的條件下，發酵6~10h，然后在攪拌條件下繼續發酵48~72h后終止發酵，其中發酵液體培養基為MM641培養基。

2.根據權利要求1所述基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法，其特征在于：所述MM641培養基配方包括碳源、氮源、NH₄Cl、MgCl₂·6H₂O、KH₂PO₄、K₂HPO₄、FeCl₃·6H₂O、刃天青、微量元素。

3.根據權利要求2所述基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法，其特征在于：微量元素包括Fe²⁺、Fe³⁺、Zn²⁺、Mn²⁺、Co²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺、Mo⁶⁺、B³⁺，碳源為葡萄糖、木糖、果糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露醇、乳糖、麥芽糖、木聚糖、淀粉、果膠或纖維二糖；氮源為胰蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母提取物、水解乳蛋白、水解酪蛋白的一種或任意比多種。

4.根據權利要求3所述基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法，其特征在于：MM641培養基為5~10g/L碳源、2~5g/L氮源、0.6~1.0g/L NH₄Cl、0.4~1.0g/L MgCl₂·6H₂O、0.5~1.5g/L KH₂PO₄、1~4g/L K₂HPO₄、0.5~1.0g/L刃天青、5~10mmol/L Fe²⁺、8~12nmol/L Fe³⁺、0.4~0.6mmol/L Zn²⁺、0.4~0.6 mmol/L Mn²⁺、0.6~1.0 mmol/L Co²⁺、10~16 nmol/L Cu²⁺、0.08~0.2 mmol/L Ni²⁺、0.16~0.20 mmol/L Mo⁶⁺、0.08~0.2 mmol/L B³⁺。

5.根據權利要求1所述基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法，其特征在于：步驟（1）固體培養基為采用NaOH溶液調節MM641培養基的pH值為6.0~8.0，煮沸，加入0.5~1.0g/L半胱氨酸鹽酸鹽、2~4g植物凝膠，滅菌，凝固。

6.根據權利要求1所述基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法，其特征在于：發酵罐液體培養基為采用NaOH溶液調節MM641培養基的pH值為6.0~8.0，煮沸，加入0.5~1.0g/L半胱氨酸鹽酸鹽，滅菌，冷卻至溫度為50~60℃，通入氮氣或二氧化碳，通氣流量為10~30L/h。

7.根據權利要求1所述基于pH值控制的高溫厭氧菌生產乙醇的方法，其特征在于：液體培養基為采用NaOH溶液調節MM641培養基的pH值為6.0~8.0，煮沸，加入0.5~1.0g/L半胱氨酸鹽酸鹽，通入氮氣或二氧化碳，通氣量為10~20L/h，冷卻，滅菌。