[發明專利]一種嗜酸乳桿菌S-層蛋白分子印跡傳感器及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201710285327.1
• 申請日: 2017-04-27
• 公開（公告）號: CN107219173B
• 公開（公告）日: 2020-08-04
• 發明（設計）人: 潘道東;李建林;郭宇星;荀明月
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C07K14/335;C07K1/14
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 余俊杰

1.一種嗜酸乳桿菌S-層蛋白分子印跡傳感器，其特征在于，所述傳感器以二氧化硅為載體，S-層蛋白為模板分子，甲基丙烯酸為功能單體，二甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯劑；所述分子印跡傳感器由以下方法制得：

（1）將單分散性良好的SiO₂顆粒超聲分散在乙醇溶液中，濃度為0.3g/mL；

取10mL分散好的SiO₂乳液至小燒杯，然后載玻片垂直插入燒杯中固定好，通過垂直沉降法，使膠體顆粒自組裝在潔凈的載玻片上，形成三維有序的膠體顆粒陣列，待溶劑完全揮發后，得到具有三維有序排列結構的SiO₂膠體晶體，形成光子晶體薄膜；

（2）將光子晶體薄膜在500℃條件下處理1h，以增強其機械性能；

然后對其進行表面修飾，具體操作為：將其浸泡在piranha洗液中12h，使SiO₂微球表面暴露出羥基基團，然后用雙蒸水清洗干凈并用氮氣流吹干；接下來將光子晶體薄膜浸泡于含有5％APTES的乙醇溶液中1h，使微球表面產生氨基基團；然后將光子晶體薄膜浸泡于含有5％戊二醛的PBS溶液2.5h，戊二醛一端的醛基與SiO₂微球上的氨基發生反應，使微球醛基化；

然后以PBST洗液多次清洗光子晶體薄膜，并將清洗后的薄膜置于濃度為1mg/mL S-層蛋白的PBS溶液中，4℃下保持12h，使S-層蛋白分子上的氨基與SiO₂微球表面的醛基縮合，實現蛋白在微球表面的共價連接；

（3）配置水凝膠預聚液：甲基丙烯酸0.5mL，二甲基丙烯酸乙二醇酯0.25mL，甲醇1mL，將配置好的預聚液放置在4℃下靜置12h，使其充分混合；然后向預聚液中加入10mg光引發劑偶氮二異丁腈，超聲10min使其混合均勻，并持續通入氮氣10min以排盡其中的氧氣；

（4）取步驟（2）制備的光子晶體基片，在其表面覆蓋一層75mm×25mm的有機玻璃，并用夾子固定好，形成上層為PMAA有機玻璃，中間為光子晶體薄膜，下層為載玻片的三明治結構；用移液槍預聚液緩慢地注入玻璃縫隙，在毛細作用力下預聚液會進入玻璃空隙，直到光子晶體薄膜的顏色變透明則預聚液得到了充分浸透；

在冰浴條件下用波長為365nm的紫外燈照射30min引發預聚液發生光聚合；

（5）將步驟（4）處理后的光子晶體薄膜浸泡于2%氫氟酸溶液中，除去SiO₂顆粒，得到三維有序的反蛋白石光子晶體水凝膠膜；接著將水凝膠膜在NaOH和NaClO的混合溶液中處理6小時，然后用醋酸的SDS溶液反復清洗三次以除去水凝膠膜中的模板蛋白，即獲得嗜酸乳桿菌S-層蛋白分子印跡傳感器。

2.權利要求1所述的嗜酸乳桿菌S-層蛋白分子印跡傳感器在檢測嗜酸乳桿菌S-層蛋白中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述嗜酸乳桿菌S-層蛋白的濃度與Bragg衍射峰的位移呈線性關系。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述傳感器的響應速度小于3分鐘。

5.權利要求1所述的嗜酸乳桿菌S-層蛋白分子印跡傳感器在嗜酸乳桿菌S-層蛋白富集中的應用。